化学发光 (chemiluminescence)检测方法自问世以来,就以其超高的检测灵敏度受到众多科研工作者的青睐。之前由于普通的显色法价格便宜,而化学发光法成本高昂而受到一定的限制。目前化学发光试剂的价格已经非常亲民,Western、Northern、Southern、EMSA等研究已经大部分都采用化学发光法了。化学发光法使用的主要是ECL (enhanced chemiluminescence)类试剂。基于辣根过氧化物酶的化学发光方法的原理是,辣根过氧化物酶在H2O2存在下,氧化化学发光物质鲁米诺(luminol,氨基苯二酰一肼)并发光,在化学增强剂存在下光强度可以增大1000倍,通过将印迹膜放在X光片上感光或者直接进行化学发光成像就可以检测辣根过氧化物酶的存在。
这个原理看起来很简单是不是,但是在实践中,许多ECL类试剂容易出现灵敏度不够、易淬灭、发光时间短、不稳定等等问题。
化学发光检测作为western blot等实验的最终实验环节,关系着最后的实验结果。这一步骤出了问题,无异于万里长征踏错了最后一步,直接坠入深渊,前面的跋山涉水全都成了竹篮打水一场空,相信遇到此种情况的小伙伴们无不捶胸跺足,呜呼哀哉!
不要担心,碧云天的BeyoECL系列产品可以完美解决上述问题,下面就让我们一起来了解下吧!
碧云天BeyoECL系列
碧云天BeyoECL系列共有三款产品,分别是:
那么它们都有哪些产品优势呢?又有什么区别呢?该如何挑选呢?不要着急,请听小编为你一一道来。
产品优势
1.Cell等1400多篇文献的选择
BeyoECL 系列产品自诞生以来,就获得广大用户的高度认可。根据Googlescholar数据,迄今为止使用BeyoECL系列产品发表的文献已经达到了惊人的1400多篇。有很多高大上的论文也使用了碧云天的BeyoECL系列产品。例如,2017年4月, CELL的一篇论文就注明使用了BeyoECL Star:
Yang Yang,Bei Liu,Jun Xu,Jinlin Wang et al. Derivation of Pluripotent Stem Cells with In Vivo Embryonic and Extraembryonic Potency. CELL, 2017, 169(2): 243-257.
https://www.cell.com/cell/fulltext/S0092-8674(17)30183-6
由于引用文献实在太多,不便一一罗列,具体参见以下链接中的“相关论文”页签:http://www.beyotime.com/product/P0018AM.htm
2.灵敏度高
BeyoECL系列产品的检测灵敏度从BeyoECL Plus到BeyoECL Star再到BeyoECL Moon依次递增。不管与碧云天产品还是国外同类产品,BeyoECL Moon的发光强度均胜出一筹! (参考图1及图2)。
图1. BeyoECL Moon和碧云天的BeyoECL Plus以及BeyoECL Star的发光效果对比。相同量的辣根过氧化物酶标记二抗与发光试剂混合后,在暗室中用普通相机拍照检测,拍照效果和肉眼观察效果基本一致。图中可见此三个产品的发光强度:BeyoECL Moon>> BeyoECL Star>> BeyoECL Plus。
图2. BeyoECL Moon和T公司SuperSignal West Dura以及碧云天的BeyoECL Star的检测效果对比。相同量的HRP-IgG (500pg),与发光试剂混合后至图中指定时间检测化学发光。图中可见BeyoECL Moon在1小时内发光效果显著优于SuperSignal West Dura和BeyoECL Star。30分钟内发光效果可达SuperSignal West Dura的约1.8-3.6倍,BeyoECL Star的4.2-6.9倍。
那么用在Western Blot上的效果呢?
我们比较了BeyoECL Star,BeyoECL Moon与T公司的飞克级检测试剂SuperSignal West Dura,三者的检测效果相近,BeyoECL Moon的效果略佳(参考图3)
图3. BeyoECL Moon和T公司SuperSignal West Dura及碧云天的BeyoECL Star的Western blot的检测效果对比图。Western检测过程中仅发光试剂不同,其余完全相同。图中可见,碧云天的BeyoECL Star的检测灵敏度大约为SuperSignal West Dura的50%左右,而BeyoECL Moon的检测灵敏度与SuperSignal West Dura相当或略佳。
3.发光时间长
BeyoECL 系列的发光时间可持续数小时。其中以BeyoECL Star发光的衰减最为缓慢,在10微升1-10纳克/微升辣根过氧化物酶标记IgG中,加入100微升碧云天的 BeyoECL Star工作液后在不同时间点通过化学发光仪(luminometer)检测化学发光。检测数据显示20分钟后发光无明显减弱,60分钟后发光强度减弱至初始发光强度的约85%左右,120分钟后发光强度减弱至初始发光强度的约70%左右(参考图4)。
图4. BeyoECL Star检测不同剂量HRP-IgG,20分钟后发光效果几乎不变,120分钟后发光效果仍然良好。
4.稳定性好
BeyoECL 系列采用了全新配方,非常稳定。三款产品即使在37℃水浴孵育30天,和4℃保存的试剂相比,对相同样品的检测效果无任何明显差异。
5.背景低
BeyoECL 系列的背景很低,对PVDF膜和硝酸纤维素膜均适用。
说了这么多,相信大家对BeyoECL系列产品已经有了一定的了解,细心的小编已经为大家做好了归纳总结,快来pick适合你的产品吧!
如何选择碧云天BeyoECL系列产品?
对于常规检测,优先推荐使用性价比更高综合性能比较均衡的BeyoECL Star;对于较难检测的目的条带或者条带非常弱的情况,推荐使用BeyoECL Moon。BeyoECL Moon检测时,对于容易检测的蛋白,需要减少上样量或者减少一抗的用量,否则很容易产生条带过曝的情况。
对于丰度特别高的蛋白,例如内参的检测、过表达的标签蛋白、纯化的重组蛋白等的western检测,可以考虑使用检测灵敏度略低的BeyoECL Plus。