双萤光素酶报告基因检测(Dual-Luciferase Reporter Assay)是先以萤光素(luciferin)为底物来检测萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase),后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海肾萤光素酶(Renilla luciferase),并且在后续加入海肾萤光素酶底物时,同时加入抑制萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的物质,该物质可以淬灭约99.9%以上的萤火虫萤光素酶信号,使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性,从而实现双萤光素酶报告基因检测。
通常把感兴趣基因的转录调控元件或5'启动子区克隆在luciferase的上游,或把3'UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞,用适当药物等处理细胞后裂解细胞,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。Renilla luciferase相对更多地被用作转染效率的内参,以消除细胞数量和转染效率的差异。
碧云天拥有系列自主研发、高性能、数据稳定、检测快速的萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028),凭借一系列高质量试剂盒产品,以及多年积累的丰富检测经验,确保报告基因检测数据准确、稳定、可靠。详细的双萤光素酶报告基因检测技术服务介绍请点击碧云天双萤光素酶报告基因检测技术服务介绍 。
碧云天双萤光素酶报告基因检测技术服务项目表:服务编号 | 服务名称 | 服务时间 | 全额预付特价(元) | 半额预付特价(元) | 零首付价(元) | 服务内容 | 交付结果 |
T5501 | 报告基因质粒构建 | 7-10个工作日 | 1.0元/bp | 1.1元/bp | 1.2元/bp | 构建报告基因质粒 | 提供质粒干粉; 酶切报告。 |
T5502 | 细胞培养、处理与转染 | 10-15个工作日 | 2000元/次 | 2300元/次 | 2500元/次 | 细胞培养,质粒转染以及细胞干预处理 | 萤光素酶活性检测报告,含数据分析 |
T5503 | 启动子活性检测 | 1-2个工作日 | 1800元/次 | 2000元/次 | 2200元/次 | 多功能酶标仪检测RLU值 | |
T5504 | microRNA与靶基因互作 | 1-2个工作日 | 1800元/次 | 2000元/次 | 2200元/次 |
图A, B:Dual-Lumi™双萤光素酶报告基因检测试剂盒对萤火虫萤光素酶报告基因质粒和海肾萤光素酶报告基因质粒共转染的不同数量的HeLa细胞的检测效果。说明该试剂盒的检测灵敏度高,测定样品的线性范围宽。图C:HeLa细胞转染启动子报告载体(X-pGL3-Basic)、转录因子载体以及内参载体(pRL-TK)以验证转录因子与启动子的具体结合位点。
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