蛋白膜重复使用,轻松解决 一抗二抗去除液,任选所需 |
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在Western实验中,完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后,有时还需要检测tubulin、actin等表达量相对稳定的蛋白作为内参,或检测其它目的蛋白进行比较。此时可以选择适当的一抗二抗去除液,充分去除结合在蛋白膜(通常为PVDF膜或NC膜)上的一抗和二抗。这样就可以非常方便地重复利用使用过的蛋白膜检测其它目的蛋白。和重新跑一次SDS-PAGE胶相比,不仅省时省力,而且可以消除重新上样而带来的误差,使可比性更强。 各种一抗二抗去除液的主要特点和差异: |
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用于普通的Western检测时蛋白膜上一抗二抗的去除可以任选一种去除液。如果是NC膜,即硝酸纤维素膜时,不宜选用P0025N。从时间角度考虑,强碱性、弱碱性和中性的去除液所需的时间都比较短,可以优先考虑。从价格因素考虑,强碱性的去除液性价比最高。从安全性考虑,中性的去除液由于没有腐蚀性而表现出更高的安全性。弱碱性和弱酸性一抗二抗去除液的安全性次之。但只要正确操作,并进行适当防护,使用强碱性的一抗二抗去除液也是完全可行的。 对于特定的抗原和抗体,很难说哪一种Western一抗二抗去除液的效果最好。在遇到一抗二抗去除效果欠佳时,可以考虑适当延长一抗二抗去除液的孵育时间,同时确保孵育时的温度不低于20℃。温度过低时一抗二抗的去除效果会下降。同时也可以考虑尝试其它的一抗二抗去除液,以摸索出最佳的适合您实验条件的Western一抗二抗去除液。 |
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