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我们都知道2016年大隅良典因细胞自噬获得诺贝尔医学或生理学奖,所以大家即便不做细胞自噬的相关研究,也基本都听过这个名词。那么什么叫细胞自噬呢?
自噬其实是细胞内的一种「自食(Self-eating)」的现象,字面上的理解也就是自己吃自己。
不过这里的「自噬」不是将自己杀死,实则是一种细胞自身成分降解和循环的基本过程。
简单来说就是:细胞里有一个吃货,叫“溶酶体”,它还有个专门负责给它找吃的并送货上门一条龙服务的小弟,叫“自噬体”,大佬饿了,小弟就要在细胞里到处找东西给大佬吃。
当然,大佬还是大佬,不是什么东西都吃的,作为一个有节操的吃货,大佬专挑蜕变的、破损的细胞成分下嘴。而这个过程,就是“细胞自噬”。
而自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用,自噬已经成为细胞生物学领域的一个新的研究热点。这一点我们可以从发表的文章数量上看出来:
图1:2006-2019年自噬研究论文数目增长图(数据来源于NCBI)
自噬过程中会涉及到很多的蛋白发挥作用,其中p62与LC3B是自噬研究中的明星蛋白。下面就让小编为大家慢慢道来~
LC3B蛋白
LC3B被认为是细胞自噬信号通路最为关键的标志性蛋白,具有125个氨基酸残基。在蛋白合成后,被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白,从而暴露出C端的甘氨酸,人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中,其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程,成为LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同,LC3B II定位于自噬体(autophagosome)的内膜和外膜上,在自噬体与溶酶体融合后,自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切,而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。这种定位信息可作为自噬膜的常用标记,还可监控其发展变化的过程。
P62蛋白
p62也称sequestosome I (SQSTM1),在多细胞生物(不包括植物和真菌)中高度保守,主要分布于细胞质,也可以定位于细胞核、自噬体(autophagosome)和溶酶体(lysosome)中。p62可作为将要被自噬作用降解的小泡的受体,也可作为要被清除的泛素化蛋白聚集物的受体。p62蛋白可结合泛素,也可与LC3结合,从而靶向自噬体并促进泛素化蛋白的清除。
碧云天最新推出细胞自噬研究新利器!帮您轻松搞定细胞自噬检测!
质粒
小编为大家整理了这几种新品质粒的相关特点,详情见下表:
产品名称 | 启动子类型 | 抗性 | 荧光颜色 | 是否可稳转 | 筛选方式 |
pCMV-GFP-LC3B | CMV启动子 | 卡那霉素 | 绿色荧光 | 是 | 可以使用G418筛选 |
pCMV-GFP-p62 | CMV启动子 | 卡那霉素 | 绿色荧光 | 是 | 可以使用G418筛选 |
pCMV-mCherry-p62 | CMV启动子 | 卡那霉素 | 红色荧光 | 是 | 可以使用G418筛选 |
pCMV-mCherry-GFP-LC3B | CMV启动子 | 卡那霉素 | 红绿双色荧光 | 是 | 可以使用G418筛选 |
pCMV-GFP-LC3B/ pCMV-GFP-p62是碧云天自行研发的在哺乳动物细胞中表达GFP标签的人源LC3B/p62 融合蛋白的质粒,转染细胞后能够在靶细胞中高效表达绿色荧光蛋白GFP标签的LC3B或p62融合蛋白,呈现明亮的绿色荧光。在用pCMV-GFP-LC3B转染细胞后,在非自噬的情况下,荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中;而在自噬的情况下,GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上,以斑点的形式表现出来(LC3B dots or punctae)。在用pCMV-GFP-p62转染细胞后,GFP-p62通常以绿色点状 (puncta)或较为弥散的斑块状(speckles)荧光存在于细胞质和细胞核中。在自噬被抑制的情况下,这种绿色的点状或斑块状物其大小会变大而且数目会变多。
产品订购信息:
产品编号 | 产品名称 | 包装 | 产品价格 |
D2815-1μg | pCMV-GFP-LC3B | 1μg | |
D2815-100μg | pCMV-GFP-LC3B | 100μg | |
D2817-1μg | pCMV-GFP-p62 | 1μg | |
D2817-100μg | pCMV-GFP-p62 | 100μg |
mCherry是一种来自于蘑菇珊瑚(mushroom coral)的单体红色荧光蛋白,溶酶体内的酸性环境会导致GFP荧光淬灭,而mCherry则更为稳定。pCMV-mCherry-p62是碧云天研发的在哺乳动物细胞中表达红色mCherry标签的人源p62融合蛋白的质粒。转染后能够在靶细胞中高效表达带有红色荧光蛋白mCherry标签的p62融合蛋白,呈现明亮的红色荧光。
产品订购信息:
产品编号 | 产品名称 | 包装 | 产品价格 |
D2818-1μg | pCMV-mCherry-p62 | 1μg | |
D2818-100μg | pCMV-mCherry-p62 | 100μg |
自噬小体在与溶酶体融合过程中,GFP会被溶酶体酸性环境所淬灭,这为追踪GFP-LC3B的细胞定位增加了难度;此时可以发出红色荧光的mCherry因为其卓越的稳定性而被保留。因此,通过融合表达mCherry-GFP-LC3B蛋白,可以更加有效地追踪自噬过程。
碧云天研发了可以在哺乳动物细胞中同时表达红色mCherry和绿色GFP双标签的人源LC3B融合蛋白的质粒pCMV-mCherry-GFP-LC3B,转染后能够在靶细胞中高效表达带有红色荧光蛋白mCherry和绿色荧光蛋白GFP双重标签的LC3B的融合蛋白,呈现明亮的红色和绿色荧光。
产品订购信息:
产品编号 | 产品名称 | 包装 | 产品价格 |
D2816-1μg | pCMV-mCherry-GFP-LC3B | 1μg | |
D2816-100μg | pCMV-mCherry-GFP-LC3B | 100μg |
腺病毒
除了质粒之外,说到自噬研究怎么可以缺少腺病毒呢!
Ad-GFP-p62与Ad-mCherry-p62是碧云天自行研发的重组腺病毒,感染后能够在靶细胞中有效表达GFP或mCherry和p62的融合蛋白,呈现明亮的绿色荧光或红色荧光,可以用于细胞自噬的检测。该系列腺病毒采用了成熟的E1缺陷型重组腺病毒载体系统,感染普通的细胞后不能进行扩增和重组,从而可以有效降低本产品在活体生物中的风险。感染细胞后,荧光显微镜下GFP-p62通常以绿色点状 (puncta)或较为弥散的斑块状(speckles)荧光存在于细胞质和细胞核中。在自噬被抑制的情况下,这种绿色的点状或斑块状物其大小会变大而且数目会变多。mCherry-p62则为红色荧光。
感染效率也超优秀!有图为证:
图2. Ad-GFP-p62感染NIH3T3细胞48小时后进行Hoechst 33342染色的效果图。图中可见清晰的点状或斑块状分布的p62的绿色荧光。
图3. Ad-mCherry-p62感染NIH3T3细胞48小时后进行Hoechst 33342染色的效果图。图中可见清晰的点状或斑块状分布的p62的红色荧光。
此外,我们还可提供表达mCherry-GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒以及表达GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒。更有全新升级改造后的AdPlus-mCherry-GFP-LC3B腺病毒产品(点击了解),全面助力自噬研究!
产品订购信息:
产品编号 | 产品名称 | 包装 | 产品价格 |
C3015-1ml | Ad-GFP-p62 | 1ml | |
C3015-10ml | Ad-GFP-p62 | 10ml | |
C3016-1ml | Ad-mCherry-p62 | 1ml | |
C3016-10ml | Ad-mCherry-p62 | 10ml | |
C3006-1ml | Ad-GFP-LC3B | 1ml | |
C3006-10ml | Ad-GFP-LC3B | 10ml | |
C3011-1ml | Ad-mCherry-GFP-LC3B | 1ml | |
C3011-10ml | Ad-mCherry-GFP-LC3B | 10ml | |
C3012-1ml | AdPlus-mCherry-GFP-LC3B | 1ml | |
C3012-10ml | AdPlus-mCherry-GFP-LC3B | 10ml |
抗体
除了质粒和腺病毒之外,抗体在自噬研究中也是不可或缺的。我们可提供多种类型抗体供您选购!
产品信息:
多种产品,选择灵活,使用方便,更有超高性价比!
赶快根据自己的需要选购吧!