在新型冠状病毒疫情防治工作中，对患者“早发现，早报告，早隔离，早诊断，早治疗”是控制传染源，阻断传播途径的重要措施。然而，在病例确诊过程中，不断出现检测结果“假阴性”情况，从而可能造成患者病情加重，甚至传染源无法及时隔离，导致更大规模的传染。

目前最常用的核酸检测方法即实时荧光RT-PCR，它可以分为染料法和探针法两种。 疫情发生后，国家病原微生物资源库迅速公布了新型冠状病毒核酸检测和引物序列及荧光探针序列。美国CDC也发表了新型冠状病毒检测指导建议，在官方指导建议中，推荐使用的方法即是探针法RT-PCR。

那么探针法和染料法的区别是什么呢？为什么官方建议使用探针法呢？
一般使用的探针法即为TaqMan探针，TaqMan 探针是一段寡核苷酸单链，与目标DNA互补，探针两端分别有一个报告基团和一个淬灭基团，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，不会检测到荧光，PCR扩增时，Taq DNA聚合酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，报告基团释放并发出荧光。每合成一条DNA链，就会切断一条探针，并产生一个单位荧光信号，信号的强度与结合到DNA链上的探针成正比。

染料法一般采用SYBR Green染料， SYBR Green是一种DNA双链小沟结合染料，游离时发光极微弱，结合DNA后荧光强度明显增强。每形成一条双链，就有相应数目的SYBR Green嵌入，并产生荧光信号，荧光的强度与体系中双链的浓度成正比，从而保证了荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步，荧光的强度就代表了体系中双链产物的浓度。

探针法与染料法的最大区别在于，理论上探针法中的荧光信号只来源于目标序列，也就是不受非特异性扩增及引物二聚体的影响，而染料法检测的是体系中的所有双链 DNA,因此一些非特异性扩增或者引物二聚体的出现，会极大的影响真实结果的准确性。因此探针法与染料法相比，特异性更高，检测灵敏度更高，并且荧光背景也更低。除此之外，利用不同探针，可以在一个体系中使用不同的荧光标记同时检测多种指标。而染料法无法在同一个反应中检测多个目的片段，对于复杂序列，如果难以扩增的话，也会受到脱靶效应（如引物二聚体）的影响。基于此，在新型冠状病毒检测时，更推荐使用探针法qRT-PCR。因此我们也可以看到在qPCR检测中，探针法qPCR灵敏度更高，特异性更好。

为助力2019冠状病毒病检测，碧云天全新推出探针法qPCR Mix。碧云天的BeyoFast™Probe qPCR Mix (2X)是一种基于TaqMan等探针的用于实时荧光定量PCR，即探针法qPCR(Quantitative PCR)或real-time PCR的高品质预混液，主要用于cDNA和基因组DNA等的特异性超高灵敏度定量检测。

本产品特别适合用于低丰度或高特异性的目的基因的定量或定性检测。例如一些低丰度的mRNA、lncRNA、小RNA、微生物RNA反转录后的高灵敏度检测，一些相似度较高的常规染料法难以区分的同源基因或者基因的SNP检测。

产品特点：
特异性好，灵敏度高：本产品使用TaqMan探针法和与抗体结合的高品质热启动taq酶，检测灵敏度和特异性通常要显著高于使用SYBR Green等荧光染料的方法。
可用于多重检测：可同时用于2-3个基因的检测。
操作简单，使用便捷：本产品包含qPCR所需的通用组分，用户只需自备引物、探针、样品DNA和去离子水即可。
选择广泛：可根据实际所用仪器选择含高浓度ROX (High ROX)、低浓度ROX (Low ROX)或不含ROX的BeyoFast™Probe qPCR Mix。

本产品具有特异性好，灵敏度高的特点，可提高检测分辨率，能够检测出更低丰度的目的基因。

产品信息：

产品编号	产品名称	包装	产品价格
D7271-1ml	BeyoFast™Probe qPCR Mix (2X)	1ml
D7271-5ml	BeyoFast™Probe qPCR Mix (2X)	5ml
D7271-25ml	BeyoFast™Probe qPCR Mix (2X)	25ml
D7272-1ml	BeyoFast™Probe qPCR Mix (2X, Low ROX)	1ml
D7272-5ml	BeyoFast™Probe qPCR Mix (2X, Low ROX)	5ml
D7272-25ml	BeyoFast™Probe qPCR Mix (2X, Low ROX)	25ml
D7273-1ml	BeyoFast™Probe qPCR Mix (2X, High ROX)	1ml
D7273-5ml	BeyoFast™Probe qPCR Mix (2X, High ROX)	5ml
D7273-25ml	BeyoFast™Probe qPCR Mix (2X, High ROX)	25ml

常用仪器所需ROX类型请参考如下表格

添加ROX类型	适用PCR仪
不需添加	Bio-Rad: CFX384, CFX96, MiniOpticon, iCycler IQ, MyiQ and iQ5; Eppendorf: Mastercycler ep realplex and realplex2 s; Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 6000; Roche LightCycler 480; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR
Low ROX	ABI:7500(Fast), ViiA 7, QuantStudio 6 and 7 Flex Systems; Stratagene: Mx3000P, Mx3005P and Mx4000; Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 3000; Bio-Rad/MJ: Chromo4, Opticon 2 and Opticon;
High ROX	ABI GeneAmp 5700; ABI PRISM 7000, 7700; ABI 7300, 7900HT(Fast); ABI StepOne(Plus)

此外，我们也即将推出One-Step qRT-PCR Kit，敬请期待！

在这场没有硝烟的战役中，只要我们携手战“疫”，众志成城，一定能够共度难关！