新品推荐:RNA研究好帮手(二)

小RNA克隆、建库和分析鉴定重磅新品

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亲爱的小伙伴们,相信大家都陆续回到实验室开展试验啦

小编温馨提示:经历了这么长的假期 要赶快沉下心来哦, 毕竟时光一去不复返,“毕业”这道关还是要过的 上期新品推荐栏目我们为大家介绍的是最新推出的T4RNA连接酶。 戳我了解详情 其中T4 RNA Ligase 2, truncated由于只能利用5’端预腺苷酰化的单链DNA或RNA作为3’端接头,可以大大降低连接反应的背景,通常是小RNA等建库时的优先选择。 本次新品推荐即为大家带来的是小RNA克隆、建库和分析鉴定重磅新品。

5’ DNA Adenylation Kit
碧云天生产的5’ DNA Adenylation Kit,即5’DNA腺苷酰化试剂盒,是一种非常便捷和高效的通过酶学方法将单链DNA (ssDNA) 5’端腺苷酰化修饰的试剂盒。以5’端磷酸化的单链DNA为底物,腺苷酰化酶将ATP分解成AMP和PPi,AMP转移到单链DNA的5’磷酸基团上,形成腺苷酰化单链DNA,从而制备出腺苷酰化接头(linker)。该试剂盒制备产生的5’端腺苷酰化修饰的单链DNA,常用于miRNA等3’端为羟基的RNA或3’端为羟基的单链DNA在克隆、高通量测序建库或PCR检测等时,在3’端添加的接头。

图1. 使用碧云天生产的5’ DNA Adenylation Kit制备5’端腺苷酰化修饰单链DNA的效果图。反应体系为20μl,单链DNA的终浓度为5μM,反应条件为65ºC分别孵育15、30、45、60和90min,反应完毕后85ºC孵育5min终止反应。电泳上样前95ºC孵育5min随后置于冰浴以充分变性,尿素(7M)变性聚丙烯酰胺凝胶(15%)进行凝胶电泳分析。如图所示,本试剂盒在15min内就可以将大部分5’端磷酸化单链DNA (pDNA)催化生成腺苷酰化的单链DNA (AppDNA),孵育60min可以确保将95%以上的底物转化成腺苷酰化修饰的单链DNA。
产品优势:
1.   方法简便:单步反应即可完成5’端磷酸化修饰的单链DNA或RNA的腺苷酰化修饰,与传统的化学方法相比较,更加简便 2.   底物转化效率高:底物转化效率高达95%以上,无需切胶纯化仅需酒精沉淀等即可用于后续反应 3.   有效减少相关干扰:可以有效避免二级结构对于5’端腺苷酰化修饰反应的干扰, 4.   适用反应体系广泛:适用于pmol级别底物量的反应体系,也可以很方便地放大至µmol级别底物量的反应体系。

产品订购信息:

产品编号 产品名称 包装
R0716S 5’ DNA Adenylation Kit 10次
R0716M 5’ DNA Adenylation Kit 50次
自制linker太繁琐?没关系,我们有现成哒~

Universal miRNA Cloning Linker (5´腺苷化3´封闭)
碧云天生产的Universal miRNA Cloning Linker (5´腺苷化3´封闭),即通用miRNA克隆接头(5´腺苷化3´封闭)或Universal miRNA Cloning Linker (5′ adenylated, 3′ blocked),是一种常用于miRNA等3’端为羟基的RNA或3’端为羟基的单链DNA在克隆、高通量测序建库或PCR检测等时,在3’端添加的接头。RNA连接酶可以识别“活化”的5´端腺苷酰化的本产品,在无需添加ATP的条件下,就能实现本产品5’端和目标序列3’羟基的特异性共价连接。
用途:
本产品可以应用于小RNA克隆、miRNA文库构建。
产品优势:
本产品条带清晰,纯度高,与5’端为磷酸化的序列相比有显著的电泳迁移率差异(图2A);并且本产品使用T4 RNA ligase 2 (T4 Rnl2), truncated与ssRNA连接时,连接效率非常高(图2B)。

图2. Universal miRNA Cloning Linker Linker (5´腺苷化3´封闭)及其连接效果图图。图A. 本产品5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´ (AppDNA)与5´-pCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´ (pDNA)的电泳对比图。图B. 本产品(AppDNA)与ssRNA使用T4 RNA ligase 2 (T4 Rnl2), truncated的连接效果图。图中可见本产品与ssRNA有非常高的连接效率。

产品订购信息:

产品编号 产品名称 包装
R0702S Universal miRNA Cloning Linker (5´腺苷化3´封闭) 1µg
R0702M Universal miRNA Cloning Linker (5´腺苷化3´封闭) 5µg
有的宝宝们又会问啦:有没有所有反应试剂都涵盖的试剂盒呢?下单一次全搞定,省时省力又省心!毕竟时间有限,下单准备所有的试剂还要好大的功夫呢
当然有啦!我们的小RNA 3’接头(5’腺苷化, 3’封闭)及连接试剂盒来帮您哦~

小RNA 3’接头(5’腺苷化, 3’封闭)及连接试剂盒
碧云天研发生产的小RNA 3’接头(5’腺苷化, 3’封闭)及连接试剂盒(Small RNA 3’-Linker (5’adenylated, 3’blocked) and Ligation Kit),是一种提供了5’腺苷化和3’封闭的Universal miRNA Cloning Linker及相应的连接酶和配套试剂,用于miRNA等3’端为羟基的小RNA和接头连接的试剂盒。3’端连接了接头的小RNA后续可以用于其克隆、高通量测序建库或PCR检测等。
产品优势:
1.   连接效率高,特异性好:使用本试剂盒和miRNA连接时,可以有效避免miRNA的自连、不同miRNA之间的连接、Linker的环化或Linker分子之间的连接,而仅发生Linker 5’端和miRNA 3’羟基之间的特异性连接。
2.   操作简单,使用便捷:本试剂盒提供Universal miRNA Cloning Linker,T4 RNA Ligase2, truncated以及反应所需的配套试剂,只需自备相应的反应底物,在无需ATP存在的条件下,即可将Universal miRNA Cloning Linker的5´端与底物的3´端羟基共价连接。

图3. 碧云天生产的小RNA 3’接头(5’腺苷化, 3’封闭)及连接试剂盒催化连接Universal miRNA Cloning Linker (AppDNA)和ssRNA的效果图。反应体系为20μl,Universal miRNA Cloning Linker (AppDNA)的终浓度为1μM,单链RNA的终浓度为0.5μM,反应条件为25°C孵育60min,反应完毕后立即取样在65°C孵育20min终止反应,加入变性上样缓冲液并在95ºC孵育5min后放至冰浴中,随后用15%尿素(7M)变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳,最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示,本试剂盒催化连接Universal miRNA Cloning Linker和ssRNA的效率非常高。

产品订购信息:

产品编号 产品名称 包装
R0700S 小RNA 3’接头(5’腺苷化, 3’封闭)及连接试剂盒 20次

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