钙离子在细胞的生理活动中起着重要的作用,游离钙离子浓度的变化与细胞的功能、信号的传递及其损伤和凋亡都有着密切的联系,故我们能够通过观测钙离子水平变化表征细胞的活动状态,其已经被应用在从神经科学到植物生理研究的各学科。为了满足细胞内钙离子水平变化检测的需要,碧云天研发了一系列用于钙离子(Ca2+)荧光检测的哺乳动物细胞表达质粒——pCMV-jGCaMP7系列质粒。
pCMV-jGCaMP7系列质粒包括jGCaMP7b,jGCaMP7c,jGCaMP7f,jGCaMP7s共四种,该系列质粒是在针对其M13-GFP-CaM融合蛋白中肽链相互作用的界面区域进行突变筛选并优化而得到的,是最新一代基因编码的钙离子探针系列,适用于常见细胞的细胞内钙离子水平变化检测,并且特别适合用于监测特定条件下神经元中的钙离子水平的变化。
产品原理:
pCMV-jGCaMP7系列质粒可表达经过突变和优化并适用于细胞或组织中钙离子荧光检测的M13-GFP-CaM融合蛋白。M13-GFP-CaM融合蛋白这个钙离子探针(calcium probe)中,环状排列的绿色荧光蛋白(cpGFP)一端和钙调蛋白(CaM)融合表达,另一端与可以和钙调蛋白CaM相互作用的肌球蛋白轻链激酶M13 (也称RS20)肽链融合表达。这样当钙离子结合钙调蛋白时,可以改变钙调蛋白的构象,同时也会影响和钙调蛋白相互作用的M13的构象,钙调蛋白和M13的构象改变最终导致GFP的构象改变,从而影响其荧光的强弱,最终实现对于钙离子浓度变化的检测。
图1. GCaMP7系列蛋白结构图。其中pRSET A Tag中含有6X His tag。
jGCaMP7系列的四种质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。与GCaMP6系列相比,各有其突出特点,下面将为大家详细介绍:
jGCaMP7b质粒
jGCaMP7b (brighter baseline fluorescence)为高亮度钙离子荧光探针,与GCaMP6系列相比具有更亮的本底荧光,并且灵敏度可达到GCaMP6s的3倍,未结合钙离子时的荧光强度比GCaMP6s增强50%。
图为pCMV-jGCaMP7b质粒转染Hela细胞12h后,于培养基中加入Ionomycin (2μM)后150秒内的荧光变化效果
jGCaMP7c质粒
jGCaMP7c (high contrast with low baseline fluorescence)为高对比度钙离子荧光探针,具有高对比度低和更低的背景荧光,灵敏度是GCaMP6s的2.7倍,对比度显著增强;
图为pCMV-jGCaMP7c质粒转染Hela细胞12h后,于培养基中加入Ionomycin (2μM)后150秒内的荧光变化效果
jGCaMP7f质粒
jGCaMP7f (fast kinetics)为快速响应型钙离子荧光探针,具有快速动力学特点,反应速率是GCaMP6f的5倍和GCaMP6s的3倍,更加适合检测钙离子的动态变化。
图为pCMV-jGCaMP7f质粒转染Hela细胞12h后,于培养基中加入Ionomycin (2μM)后150秒内的荧光变化效果
jGCaMP7s质粒
jGCaMP7s (sensitive and slow) 为高灵敏度钙离子荧光探针,具有高灵敏度但响应速度相对较慢的特点,灵敏度可达GCaMP6s的5倍以上,并且响应速率也比GCaMP6s快。
图为pCMV-jGCaMP7s质粒转染Hela细胞12h后,于培养基中加入Ionomycin (2μM)后150秒内的荧光变化效果
以上视频均在荧光显微镜下拍摄视频并进行了倍速处理。视频可见荧光变化过程,加入Ionomycin之前很细胞的荧光比较弱,加入Ionomycin后细胞的荧光逐渐变强,时间较长后荧光又会逐渐变弱。
小编贴心的为大家整理了主要特点,详情详见下表:
质粒名称 | 探针特点 | 启动子类型型 | 抗性 |
jGCaMP7b | 高亮度 | CMV | Km |
jGCaMP7c | 高对比度 | CMV | Km |
jGCaMP7f | 快速响应 | CMV | Km |
jGCaMP7s | 高灵敏度 | CMV | Km |
产品订购信息:
产品编号 | 产品名称 | 包装 | 产品价格 |
D2861-1µg | pCMV-jGCaMP7b | 1µg | |
D2861-100µg | pCMV-jGCaMP7b | 100µg | |
D2863-1µg | pCMV-jGCaMP7c | 1µg | |
D2863-100µg | pCMV-jGCaMP7c | 100µg | |
D2865-1µg | pCMV-jGCaMP7f | 1µg | |
D2865-100µg | pCMV-jGCaMP7f | 100µg | |
D2867-1µg | pCMV-jGCaMP7s | 1µg | |
D2867-100µg | pCMV-jGCaMP7s | 100µg |
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D2639-1µg | pCMV-C-HA | 1µg | 888.00元 |
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