近年来,生物制品在市场中所占比重越来越大,与之俱来的生物安全性问题也随之而来。其中核酸残留一项是各类质控标准的重中之重,因为DNA较好的稳定性,容易在生产过程中形成残留,而这些生物制品应用到人类疾病预防和治疗时,会带来不可控危险因素。
生物制品的核酸残留去除主要集中在病毒疫苗生产、重组蛋白药物纯化、细胞治疗和疫苗研究中缓解PBMC细胞结团以及慢病毒的大规模纯化等。
本次上新的BeyoZonase™超级核酸酶是一种来源于粘质沙雷氏菌
(Serratia marcescens)的非特异性核酸内切酶,采用碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化,可在非常宽泛的条件下降解单链、双链、线状、环状、天然或变性等各种形式的DNA或RNA,产生长度为3至5个碱基的5'-单磷酸寡核苷酸。产品用途广泛,常用于重组蛋白、病毒疫苗等生物制品中去除核酸,以及有效降低细胞、组织、微生物等蛋白裂解液样品的粘度等。
我司还可提供N端融合His-tag的BeyoZonase™超级核酸酶,该酶可通过镍柱吸附进行去除。
产品用途:
● 有效去除重组蛋白中的核酸;
● 有效去除病毒疫苗和普通重组病毒中的核酸,使其符合FDA指南中核酸污染的要求;
● 实时定量PCR测定重组病毒滴度时去除病毒包装细胞的核酸和包装质粒;
● 降低细菌或细胞裂解液由核酸导致的粘度使其易于后续操作;
● 防止细胞成团;
● 提高包涵体蛋白(inclusion bodies)复性率;
● 在二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis, 2-DE)的过程中,提高蛋白质的分离效率和双向电泳的分辨率。
产品特点:
● 稳定性好:37℃保存3-5周能保持>90%的酶活性,在25℃保存10周后,酶活性基本没有变化;
● 纯度高,内毒素极低:该产品为超纯级,纯度≥99%,无蛋白酶活性,内毒素极低,<0.25EU/KU;
● 适用范围宽:BeyoZonase™超级核酸酶需1-2mM;
Mg2+作为辅助因子促进其酶活性,最适范围和有效范围见下表:
Condition | Optimal Range | Effective Range |
Mg2+ | 1-2mM | 1-10mM |
pH | 8.0-9.2 | 6.0-10.0 |
Temperature | 37℃ | 0-42℃ |
DTT | 0-100mM | >100mM |
2-Mercaptoethanol | 0-100mM | >100mM |
Na+, K+, NH4+ | 0-20mM | 0-150mM |
PO43- | 0-10mM | 0-100mM |
Triton X-100 | / | <0.4% |
Sodium deoxycholate | / | <0.4% |
SDS | / | <0.05% |
Urea | / | <5M |
(NH4)2SO4 | / | <100mM |
● 本产品活性好,效果佳:与国际一线品牌相比,本产品效果基本一致甚至略好;
● 本产品可有效降低细胞或细菌裂解液粘度。
产品效果:
图1. 碧云天的BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%)消化质粒DNA的效果图。在50μl反应体系(10mM Tris pH8.0, 2mM MgCl2)中,加入5μg质粒DNA,及相应量的本产品或Competitor M,37℃孵育30min,反应完毕后立即置于冰浴,并加入1μl 0.5M EDTA以终止反应。取出10μl反应产物,加入2μl DNA上样缓冲液,在1%琼脂糖凝胶中电泳检测。
图2.碧云天的BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag)消化质粒DNA的效果图。在50μl反应体系(10mM Tris pH8.0, 2mM MgCl2)中,加入5μg质粒DNA,及相应量的本产品或Competitor M,37℃孵育30min,反应完毕后立即置于冰浴,并加入1μl 0.5M EDTA以终止反应。取出10μl反应产物,加入2μl DNA上样缓冲液,在1%琼脂糖凝胶中电泳检测。
图3. 碧云天的BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%)降低细胞或细菌裂解液粘度的效果图。A. HEK293细胞经RIPA裂解液(强)(P0013B)裂解后, 未加BeyoZonase™超级核酸酶的样品因大量基因组DNA释放成粘稠状,而经过终浓度25和250U/ml室温处理15min的样品不粘稠;B. 按照每克E.coli BL21(DE3)湿菌加入5ml RIPA裂解液(P0013B)的比例设置4组样品,分别加入相应量的本产品,室温处理30min,低速(350g×g)离心3min, 未经BeyoZonase™超级核酸酶处理的样品因粘稠物质较多导致大量细菌碎片悬浮在管中, 加入BeyoZonase™超级核酸酶的样品随着超级核酸酶量的增加,粘度逐渐降低,上清逐渐增多且澄清;C. 取B中10μl上清在1%琼脂糖凝胶中电泳检测, 加入BeyoZonase™超级核酸酶样品的基因组DNA被降解为小片段。
产品信息:
产品编号 | 产品名称 | 包装 | 产品价格 |
D7121-5KU | BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) | 5KU | |
D7121-25KU | BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) | 25KU | |
D7121-100KU | BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) | 100KU | |
D7121-500KU | BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) | 500KU | |
D7121-2000KU | BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) | 2000KU | |
D7126-5KU | BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) | 5KU | |
D7126-25KU | BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) | 25KU | |
D7126-100KU | BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) | 100KU | |
D7126-500KU | BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) | 500KU | |
D7126-2000KU | BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) | 2000KU |