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细胞相关> 基因表达调控> 细胞转染
BeyoPEI™转染试剂
产品编号: C0541-100ml
产品包装:100ml
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价格: ¥ 11868.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C0541-1ml BeyoPEI™转染试剂 1ml 198.00元
C0541-10ml BeyoPEI™转染试剂 10ml 1528.00元
C0541-100ml BeyoPEI™转染试剂 100ml 11868.00元

碧云天生产的BeyoPEI™转染试剂(BeyoPEI™ Transfection Reagent)是线性化聚乙烯亚胺(Polyethylenimine linear, PEI)优化改良后的升级产品,适用于把质粒、RNA和寡核苷酸高效瞬时转染到贴壁或悬浮细胞中。本转染试剂的用途和使用效果等,与Polysciences公司的PEI MAX®-Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000)、Transporter 5® Transfection Reagent和Polyplus公司的jetPEI®、PEIpro®基本一致。

BeyoPEI™是一种水溶性高分子阳离子聚合物,能够与带有负电荷的质粒、RNA和寡核苷酸等结合形成复合物,这些复合物可以黏附到带有负电荷的细胞表面,通过胞吞(Endocytosis)作用进入细胞。随后,渗透膨胀等原因使囊泡(Endosome)释放质粒、RNA和寡核苷酸等进入细胞质(图1) [1]。

图1.碧云天BeyoPEI™转染试剂(C0541)高效转染细胞的原理图。

BeyoPEI™转染试剂转染效率高,细胞毒性低,重复性好,适用于多种细胞系包括HEK293、HEK293T、HEK293F、HEK293Expi、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和HeLa细胞等。

BeyoPEI™转染试剂兼容性好,细胞转染可允许血清和抗生素存在的情况下进行,无需Opti-MEM®或无血清培养液。

BeyoPEI™转染试剂为化学合成,因此不含动物源成分(Animal origin-free, AOF)。

BeyoPEI™转染试剂浓度为1mg/ml。按照DNA用量(μg)和BeyoPEI™转染试剂(μl)的比例为1:4使用,每毫升BeyoPEI™转染试剂可以转染250μg质粒。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C0541-1ml BeyoPEI™转染试剂 1ml
C0541-10ml BeyoPEI™转染试剂 10ml
C0541-100ml BeyoPEI™转染试剂 100ml
说明书 1份
保存条件:

4ºC保存,两年有效。长期不使用可以-20ºC保存。

注意事项:

使用高纯度的DNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒,可以使用碧云天生产的质粒大量抽提试剂盒(D0026)进行抽提,以保证可以获得较高的转染效率。

转染前细胞必须处于良好的生长状态。

虽然本转染试剂可允许血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染,但使用无血清或低浓度血清(如5%或以下)、无抗生素的培养液或Opti-MEM®,转染效率可能会更好。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.贴壁细胞的转染(以6孔板为例)。
a.接种细胞:
在转染前一天(18-24小时)按照每孔约20-70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到6孔板内进行培养,使第二天转染时细胞密度能达到约70-80%。
b.准备DNA与BeyoPEI™复合物:
(a)DNA稀释液的配制:对于待转染的6孔板中每一个孔的细胞,取一个洁净无菌离心管,加入50μl细胞培养液和2μg DNA,并用移液器轻轻吹打混匀。
注:使用生理盐水(0.9% NaCl)进行DNA的稀释,可能效果更好。推荐选购碧云天的生理盐水(0.9% NaCl, 无菌) (ST341)。
(b)BeyoPEI™转染试剂稀释液的配制:对于待转染的6孔板中每一个孔的细胞,取一个洁净无菌离心管,加入40-48μl细胞培养液和2-10μl BeyoPEI™转染试剂,并用移液器轻轻吹打混匀。
注1:细胞培养液和BeyoPEI™转染试剂总体积为50μl。
注2:使用生理盐水(0.9% NaCl)进行DNA的稀释,可能效果更好。推荐选购碧云天的生理盐水(0.9% NaCl, 无菌) (ST341)。
(c)DNA与BeyoPEI™复合物的配制:将配制好的BeyoPEI™转染试剂稀释液加入到DNA稀释液中,轻轻涡旋混匀或者用移液器轻轻吹打混匀后,室温孵育10-20分钟。
注1:推荐DNA用量(μg)和BeyoPEI™转染试剂(μl)的比例为1:4,可在1:1-1:5之间进行调整,因不同的细胞类型和培养条件而有所不同,可以在上述推荐范围内自行优化,摸索最佳的转染条件。
注2:建议采用转染试剂加入到DNA溶液的顺序,效果更佳。
(d)对于不同的细胞培养容器,DNA与BeyoPEI™转染试剂用量参考下表,最佳的转染效果须自行适当优化。
96-well 48-well 24-well 12-well 6-well 6cm dish 10cm dish
细胞培养液 5μl 10μl 25μl 25μl 50μl 100μl 250μl
DNA 100ng 200ng 500ng 1μg 2μg 4μg 8μg
细胞培养液(需减去转染试剂体积) 5μl 10μl 25μl 25μl 50μl 100μl 250μl
BeyoPEI™转染试剂 0.1-0.5μl 0.2-1μl 0.5-2.5μl 1-5μl 2-10μl 4-20μl 8-40μl
将配制好的BeyoPEI™转染试剂稀释液加入到配制好的DNA稀释液中,室温孵育10-20分钟
每孔加入的复合物的量 10μl 20μl 50μl 50μl 100μl 200μl 500μl
按照上述用量每孔均匀滴加DNA与BeyoPEI™复合物,继续培养。
c.转染细胞:
(a)在DNA与BeyoPEI™复合物室温孵育的过程中,将培养有细胞的6孔板每孔换成2ml新鲜培养液。
(b)将100μl DNA与BeyoPEI™复合物均匀滴加到各孔内,随后轻轻混匀。
(c)在适宜的温度、湿度和CO2培养条件下,继续培养24-48小时后,即可用适当方式检测转染效果,例如荧光检测、Western、ELISA、报告基因等,或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。
2.悬浮细胞的转染(以10ml悬浮细胞为例)。
a.接种细胞:
转染前一天(18-24小时)根据细胞状态,接种合适的细胞密度(例如100万-150万cells/ml), 使第二天转染时细胞密度为200万-300万cells/ml。
b.准备DNA与BeyoPEI™复合物:
(a)DNA稀释液的配制:对于待转染的10ml悬浮细胞,取一个洁净无菌离心管,加入500µl细胞培养液和10μg DNA,并用移液器轻轻吹打混匀。
(b)BeyoPEI™转染试剂稀释液的配制:对于待转染的10ml悬浮细胞,取一个洁净无菌离心管,加入450-490μl细胞培养液和10-50μl BeyoPEI™转染试剂,并用移液器轻轻吹打混匀。
注:细胞培养液和BeyoPEI™转染试剂总体积为500μl。
(c)DNA与BeyoPEI™复合物的配制:将配制好的BeyoPEI™转染试剂稀释液加入到DNA稀释液中,轻轻涡旋混匀或者用移液器轻轻吹打混匀后,室温孵育10-20分钟。
注1:推荐DNA用量(μg)和BeyoPEI™转染试剂(μl)的比例为1:4,可在1:1-1:5之间进行调整,因不同的细胞类型和培养条件而有所不同,可以在上述推荐范围内自行优化,摸索最佳的转染条件。
注2:建议采用转染试剂加入到DNA溶液的顺序,效果更佳。
(d)对于不同体积的细胞培养液,DNA与BeyoPEI™转染试剂用量请参考下表(仅供参考)。
转染体系体积 10ml 20ml 50ml 100ml 200ml 500ml
细胞培养液 0.5ml 1ml 2.5ml 5ml 10ml 25ml
DNA 10μg 20μg 50μg 100μg 200μg 500μg
细胞培养液 0.5ml 1ml 2.5ml 5ml 10ml 25ml
BeyoPEI™转染试剂 20μl 40μl 100μl 200μl 400μl 1ml
将配制好的BeyoPEI™转染试剂稀释液加入到配制好的DNA稀释液中,室温孵育10-20分钟
随后加入到培养的悬浮细胞中继续培养24-96小时,后续进行目的蛋白的检测和纯化。
c.转染细胞:
(a)将1ml DNA与BeyoPEI™复合物均匀滴加到10ml悬浮细胞中。
(b)在适宜的温度、湿度和CO2培养条件下,继续培养24-96小时后,即可用适当方式检测转染效果,例如荧光检测、Western、ELISA、报告基因等,或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。
附录:
常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表:
Multiple Well Plates or Dishes Single Well Only for Plates
Diameter (Bottom, mm)* Growth Area (cm2)* Average Cell Yield Total Well Volume (ml) Working Volume (ml) Recommended Volume (ml)
6 well 34.8 9.5 9.5 × 105 16.8 1.9-2.9 2
12 well 22.1 3.8 3.8 × 105 6.9 0.76-1.14 1
24 well 15.6 1.9 1.9 × 105 3.4 0.38-0.57 0.5
48 well 11.0 0.95 9.5 × 104 1.6 0.19-0.285 0.25
96 well 6.4 0.32 3.2 × 104 0.36 0.10-0.20 0.1
384 well 2.7 0.056 5.6 × 103 0.112 0.025-0.050 0.030
1536 well 1.63 × 1.63** 0.025 2.5 × 103 0.0125 0.005-0.010 0.010
3.5cm dish 34 9 9.0 × 105 NA 1.8-2.7 2
6cm dish 52 21 2.1 × 106 NA 4.2-6.3 5
10cm dish 8.4 55 5.5 × 106 NA 11-16.5 12
15cm dish 14 152 1.5 × 107 NA 30.4-45.6 35
24.5cm dish 22.4 × 22.4** 500 5.0 × 107 NA 100-150 120
*Diameter and growth area may vary depending on the manufacturer, and the listed sizes are from Corning.
**These wells or dishes are square.
参考文献:
1.Longo PA, Kavran JM, Kim MS, Leahy DJ. Methods Enzymol. 2013. 529:227-40.
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