碧云天生物技术-BeyoOrganoid类器官传代温和消化液(C5513-500ml)

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BeyoOrganoid™类器官传代温和消化液

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产品编号: C5513-500ml

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产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
C5513-100ml	BeyoOrganoid™类器官传代温和消化液	100ml	399.00元
C5513-500ml	BeyoOrganoid™类器官传代温和消化液	500ml	1389.00元

碧云天的BeyoOrganoid™类器官传代温和消化液，即BeyoOrganoid™ Organoid Gentle Passage Digestion Solution，也称温和细胞解离试剂、Organoid Gentle Dissociation Solution，是一种专门为类器官传代培养设计的不含酶的解离试剂，适用于需要避免酶活性影响实验结果的情况，可以非常温和地将胚胎干细胞(Embryonic stem cell, ESC or ES)、诱导多能干细胞(Induced pluripotent stem cells, iPSC)等纯度和活性要求较高的细胞解离成单细胞悬液或寡细胞团(由10-30个细胞组成)，也可用于从肠隐窝(Intestinal crypts)中分离肠细胞以及细胞传代时的消化处理。本产品为碧云天BeyoOrganoid™系列类器官培养液的配套试剂。碧云天同时提供含蛋白酶和胶原酶等复合酶的BeyoOrganoid™类器官传代消化液(C5503)。

类器官(Organoid)通常指在体外显示出与体内器官或组织相似结构和功能的复杂三维(Three-dimensional, 3D)结构[1]，更严格的定义是指由干细胞或器官祖细胞发育而来的，作为体外平台模拟其对应器官的结构和功能等多个方面的3D细胞培养物[2]。类器官在形成过程中，细胞自我组建(Self-organize)并分化为功能型的微小细胞团，模拟真实器官发育，以与体内相似的方式由细胞分序(Cell sorting out)与空间特异性的谱系分化(Spatially restricted lineage commitment)调控，需激活由细胞内在成分和外在环境(细胞外基质、培养液等)介导的各种信号通路[3]。

本产品温和、高效。相比常规的Trypsin-EDTA溶液，本产品作为一种不含酶的解离试剂，可有效保持细胞的完整性和功能性，对于要求高纯度和高活性的细胞、特定细胞表面标记物以及需维持细胞间相互作用的研究来说，使用本产品可更好地保留细胞表面受体的完整性，减少对细胞膜的损伤，保持传代后细胞的活力，温和而有效地解离和分散细胞。碧云天同时提供可快速解开基质胶中蛋白质大分子间交联的BeyoOrganoid™类器官分离回收液(C5519)。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C5513-100ml	BeyoOrganoid™类器官传代温和消化液	100ml
C5513-500ml	BeyoOrganoid™类器官传代温和消化液	500ml
—	说明书	1份

保存条件：

4ºC保存，两年有效。

注意事项：

在使用本产品的过程中要特别注意避免被细菌污染。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.肠隐窝分离。
注：本步骤以小鼠肠道隐窝解离为例。
a.将BeyoOrganoid™类器官传代温和消化液平衡至室温。
b.从小鼠中分离出所需部分肠道，并用提前预冷的PBS (C0221A)仔细冲洗几次以去除内容物。
c.用剪刀(FS011/FS500)小心将肠道纵向切开，并横向切成2-5mm的小段。
d.将分割好的肠道片段投入含适量D-PBS (C0221D)的离心管中，轻轻摇晃洗涤，然后弃去D-PBS。重复本步骤洗涤肠道片段直至液体澄清。
e.将BeyoOrganoid™类器官传代温和消化液加入装有肠道片段的离心管中，确保所有组织都被覆盖。
f.37ºC孵育10-30分钟，用户可根据实际情况对孵育时间进行调整。孵育期间每隔一段时间轻柔地摇晃离心管以促进解离。对于较为难解离的片段，可以轻柔吹打组织悬液数次以帮助组织分散。
g.使用70μm细胞过滤器(FSTR070/FSTR072)对组织悬液进行过滤，去除未完全解离的大块组织碎片。
h.200×g，4ºC离心5分钟，收集沉淀，然后用适量D-PBS重悬。
i.加入含有血清或者血清替代物的培养液以终止可能剩余的解离活动。
j.根据实验需求，对分离的隐窝使用细胞计数板进行计数，以便后续培养或鉴定。
2.ESC和iPSC细胞解离。
注：本步骤以6孔板为例。其它孔板检测试剂的用量参考6孔板的用量进行适当调整。
a.将BeyoOrganoid™类器官传代温和消化液平衡至室温。
b.小心弃去旧的培养液，用适量D-PBS (C0221D)轻轻冲洗细胞层1-2次以去除残留的培养液。
c.每孔加入500μl的BeyoOrganoid™类器官传代温和消化液，摇晃培养容器使其覆盖整个细胞层。
d.37ºC孵育5-10分钟，用户可根据实际情况对孵育时间进行调整。孵育期间每隔一段时间轻柔地摇晃培养板以促进解离。
e.去除BeyoOrganoid™类器官传代温和消化液，迅速加入预热的含血清或血清替代物的培养液以终止解离活动。
f.轻轻吹打细胞悬液，帮助细胞分散为单细胞悬液或寡细胞团(由10-30个细胞组成)，过程中需避免损伤细胞。
g.根据实验需求，对分离的ESC细胞或iPSC细胞使用细胞计数板进行计数，以便后续培养或鉴定。
参考文献：
1.Rossi G, Manfrin A, Lutolf MP. Nat Rev Genet. 2018. 19(11):671-687.
2.Gu Y, Zhang W, Wu X, Zhang Y, Xu K, et al. Clin Transl Med. 2023. 13(12):e1499.
3.Corrò C, Novellasdemunt L, Li VSW. Am J Physiol Cell Physiol. 2020. 319(1):C151-C165.
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