碧云天生物技术-ER2566超级感受态细胞(D1039M)

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ER2566超级感受态细胞

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产品编号: D1039M

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产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
D1039S	ER2566超级感受态细胞	10×100μl	388.00元
D1039M	ER2566超级感受态细胞	50×100μl	1588.00元

碧云天生产的ER2566超级感受态细胞，英文名ER2566 Super Competent Cells，是一种可以用于重组蛋白表达的E. coli ER2566即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化，在严格按照使用说明进行操作时，转化效率可以达到1.0±0.5×10⁹cfu/μg DNA。

ER2566是BL21的部分基因组序列替换为K-12的同源序列后所得菌株。引入K-12的6%基因组序列后，ER2566的表型不同于BL21，表现为耐受非特异性核酸酶所引起的DNA损伤等[1]。因此，ER2566常用于表达限制性内切酶、核酸酶以及DNA聚合酶等重组蛋白。

ER2566细胞的T7 RNA聚合酶位于Lac启动子下游，适用于IPTG诱导表达系统(如pET系列) [2]。

ER2566菌株的基因型为F- λ- fhuA2 [lon] ompT lacZ::T7 gene1 gal sulA11 Δ(mcrC-mrr)114::IS10 R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 R(zgb-210::Tn10)(TetS) endA1 [dcm]。其中fhuA2赋予ER2566菌株对噬菌体T1的抗性；Δ(mcrC-mrr)114及mcr-73突变的存在使ER2566菌株无法对外源DNA进行标记、限制，提高了外源甲基化DNA的转化效率；lon和ompT蛋白酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
D1039S	ER2566超级感受态细胞	10×100μl
D1039M	ER2566超级感受态细胞	50×100μl
－	说明书	1份

保存条件：

-80℃保存，一年内有效。避免反复冻融，通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。

注意事项：

感受态细胞禁止反复冻融，并应尽可能避免冻融，反复冻融会导致转化效率大幅下降。

感受态细胞融化后，须尽快加入待转化样品，不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间，以免降低感受态细胞的转化效率。

待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%，样品体积过大会导致转化效率下降。

感受态细胞对于温度变化非常敏感，需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。

感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作，不能使用移液枪吹打混匀。

通常仅建议取部分样品用于转化，这样万一遇到转化失败的情况，还留有样品可以再次进行转化。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.解冻感受态细胞。取感受态细胞放置冰浴或冰水浴中融化，通常需要5分钟以上的时间。解冻后须尽量在10分钟内使用，放置时间过长会影响转化效率。
2.DNA样品的转化。取一管感受态细胞，加入DNA样品，例如质粒、连接产物或重组产物等，轻轻弹击管底约2-3次或轻轻晃动约2-3次以混匀，立即冰浴静置30分钟。注：所用DNA体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%，混合时不得使用移液器进行吹打。如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10分钟，后续可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。
3.热激处理。将冰浴放置的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激45秒。随后立即转移至冰水浴中静置2分钟以快速冷却至接近零度。热激及转移至冰浴过程中切勿晃动离心管。
4.复苏培养。加入900μl不含抗生素的LB培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约150rpm复苏培养1小时。如果用于质粒的转化扩增，复苏培养10-20分钟也完全足够了；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议严格进行复苏培养操作。
5.收菌涂板。约5000×g室温离心1分钟，沉淀细菌，吸除约900-950μl上清，余下约50-100μl上清。用移液器轻轻吹打并重悬菌体，随后涂布到含相应抗生素的LB平板上。注：如果用于质粒的转化扩增，可以仅取少量进行涂板；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议取所有重悬的菌液涂板。
6.将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
参考文献：
1.Anton B, Jack W, Samuelson J, Dila D, Menin J, Raleigh EA. Guide to differences between ER2566 and BL21 (DE3).
2.Rizkia PR, Silaban S, Hasan K, Kamara DS, SubrotoT, et al. Procedia Chemistry. 2015. 17:118-124.
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