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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D2006 | pUCm-T载体 | 20次 | 279.00元 |
pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片段的重组克隆。
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3'端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3'端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片段的重组载体。
| pUCm-T载体的主要信息如下: | |
| Base pairs | 2773 |
| Lac Z promoter | 142-171 |
| M13/pUC Reverse Primer | 204-221 |
| Lac Z | 222-534 |
| Multiple cloning region | 233-376 |
| M13/pUC Sequencing Primer | 378-395 |
| Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region | 972-1832 |
| ColE1 origin of replication(rep) | 1987-2606 |
pUCm-T载体的图谱如图1：
图1. pUCm-T载体图谱示意图
pUCm-T载体质粒的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2006 pUCm-T vector.pdf。
pUCm-T载体中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T)包括：
| Afl II | Age I | Apa I | Asc I | Avr II | Bbs I | Bbv II | Bcl I |
| Blp I | BsaA I | BseR I | Bsg I | BsiC I | BsiW I | Bsm I | BsmF I |
| Bsp120 I | BspM II | BsrG I | BssH II | Bst1107 I | BstB I | BstE II | BstX I |
| Bsu36 I | Dra III | Eco47 III | Eco72 I | Esp I | Fse I | Hpa I | Mlu I |
| Msc I | Mun I | Nae I | NgoM I | Nhe I | Nru I | Nsi I | PflM I |
| Pme I | Pml I | PpuM I | PspA I | Rsr II | Sac II | Sfi I | Sma I |
| SnaB I | Spe I | Spl I | Srf I | Stu I | Xca I | Xma I |
pUCm-T载体中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUCm-T once)包括：
pUCm-T载体的全序列信息： D2006 pUCm-T vector-seq.txt
pUCm-T载体是在pUC19载体的基础上改造而成，除多克隆位点外，其余序列同pUC19(GenBank Accession Number
M77789)。
少量自连的载体转化得到的克隆由于编码了LacZ基因，而在IPTG/X-Gal平板上呈现蓝色。大部分重组的载体，由于插入片段破坏了LacZ基因，因而在IPTG/X-Gal平板上转化得到白色克隆。这样就可以通过蓝白斑非常容易地筛选出重组克隆，蓝白斑筛选结果示意图如图2。
图2. pUCm-T载体的蓝白斑筛选结果示意图。pUCm-T载体和PCR产物片段进行连接，转化后在IPTG/X-Gal平板的上长出的克隆，其中白色克隆代表PCR产物片段可能插入到pUCm-T载体中，但后续还需要酶切、PCR或者测序确认。
对于重组的质粒可以使用载体多克隆位点上的两个PstI酶切位点进行PstI单酶切鉴定，也可以使用廉价且高效的EcoRI、
BamHI、XbaI、HindIII等内切酶进行双酶切鉴定。
构建完成的质粒可以通过质粒上的正反两个M13引物位点进行测序或通过T7 promoter上的T7引物位点进行测序。
构建完成的质粒可以利用T7 RNA polymerase promoter进行体外转录，用于探针标记等。
一个包装的本载体共可以进行20次连接反应。
包装清单：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2006 | pUCm-T载体 | 20μl |
| — | 说明书 | 1份 |
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
DNA聚合酶是否可以在PCR产物3'端加A需参考该DNA聚合酶的说明。对于PCR产物为平端的情况，不适合用于T载体的连接反应。对于平端的PCR产物可以先进行在3'端加A的反应，再用T载体进行克隆。
进行PCR产物克隆时需自备连接、转化等相关试剂、试剂盒。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. PCR产物纯化：
a. PCR产物可以通过PCR纯化试剂盒或凝胶回收试剂盒(例如碧云天生产的D0033 PCR纯化试剂盒或D0056 DNA凝胶回收试剂盒)进行PCR产物纯化。对于PCR产物条带不是非常单一的情况，宜采用电泳后DNA凝胶回收的纯化方法，这样可以去除PCR扩增出来的非特异性条带的干扰。
2. 连接反应：
a. 对于常规的DNA ligase连接反应，请参考下面的连接反应体系，或按DNA ligase的说明书进行操作。每个连接反应使用1微升pUCm-T载体，约0.2pmol PCR产物，在20微升连接体系中16℃连接过夜。
| Sterilized Water | ?μl |
| T4 DNA Ligase Buffer (10X) | 2μl |
| Purified PCR Product | ??μl |
| pUCm-T Vector | 1μl |
| T4 DNA Ligase (5-10U/μl) | 1μl |
| 总体积 | 20μl |
b. 对于快速连接试剂盒，请参考相应说明书进行连接反应。pUCm-T 载体的用量还是为1微升，PCR产物的推荐用量约为
0.2pmol。实际做连接反应时对PCR产物的使用量没有必要严格定量，根据PCR产物的亮度大致加入适量的PCR产物进行连接反应即可获得比较理想的连接效果。连接反应中使用的水尽量使用Milli-Q级纯水，或使用双蒸水或三蒸水。
3. 转化和筛选阳性克隆：
按照常规方法进行转化和蓝白斑筛选。转化可以采用碧云天生产的D0302 超级感受态细菌制备试剂盒。蓝白斑筛选所需的IPTG(ST098)和X-Gal(ST912)可以向碧云天购买。对于白斑可以进行酶切鉴定，通常酶切鉴定正确后可以进行测序鉴定。
相关产品：
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2006 | pUCm-T载体 | 20次 |
| D0033 | PCR/DNA纯化试剂盒 | 50次 |
| D0056 | DNA凝胶回收试剂盒 | 50次 |
| D0302 | 超级感受态细菌制备试 剂盒 | 100次 |
| ST097 | IPTG | 1g |
| ST098 | IPTG | 5g |
| ST912 | X-Gal | 100mg |
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