微信在线咨询
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D2883-1μg | pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo | 1μg | 888.00元 |
| D2883-100μg | pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo | 100μg | 1169.00元 |
pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo是碧云天研发的以毕赤酵母(Pichia pastoris)为表达菌株，表达C端带有His标签的目的蛋白的真核表达质粒。在多克隆位点(Multiple cloning sites, MCS)按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因，就可以表达C端带有His标签的目的蛋白。
毕赤酵母作为蛋白真核表达系统有很多优势：易于操作，蛋白正确折叠以及翻译后修饰等。与昆虫表达系统和哺乳动物细胞表达系统相比，它快速、高效且经济，通常外源蛋白还具有较高的表达水平。与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)相比，其外源蛋白表达水平往往高10-100倍；它们均能进行分泌蛋白的N-连接糖苷键修饰，表达分泌蛋白进行糖基化修饰时糖链长度是有差别的，毕赤酵母修饰的分泌蛋白的糖链长度通常是8-14甘露糖残基(Mannose residue)，而酿酒酵母修饰的分泌蛋白的糖链长度通常是50-150个甘露糖残基；毕赤酵母很少对分泌蛋白进行O-连接糖苷键的修饰。
本质粒转化X-33, SMD1168H或GS115菌株后，因为宿主菌有功能完好的组氨酸脱氢酶基因，适合进行Zeocin筛选转化子，并能使目的基因在甲醇诱导后实现高水平表达。常用的毕赤酵母宿主菌GS115 (D0412)和KM71 (D0413)，二者的组氨酸脱氢酶基因(his4)发生突变，阻止它们合成组氨酸，因此具有His4-营养缺陷标记，适合在组氨酸缺少的培养基进行转化子筛选。GS115/X-33/ SMD1168H菌株具有功能完整的AOX1基因，属于Mut+ (Methanol utilization plus)表型，即甲醇利用正常，在甲醇诱导的情况下生产快速。KM71/KM71H菌株的AOX1位点被ARG4基因插入破坏，表型为Muts (Methanol utilization slow)，即甲醇利用缓慢，在甲醇诱导的情况下生产缓慢。
本质粒5'端含有醇氧化酶基因AOX1启动子，可以高效启动目的基因的毕赤酵母胞内表达。在毕赤酵母中，AOX1启动子属于甲醇诱导型强启动子，其严格依赖于甲醇的诱导，并受葡萄糖、果糖、甘油、乙醇等碳源的抑制，因此可通过控制葡萄糖、甘油等碳源的消耗和甲醇的流加来调控AOX1启动子的表达。
本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)和博来霉素(Zeocin)双抗性。大肠杆菌博来霉素筛选推荐浓度为25-50μg/ml (低盐LB培养基，NaCl浓度不能超过5g/L)，酵母筛选推荐浓度为50-300μg/ml (YPD或基本培养基)。氨苄青霉素通常配制成100mg/ml的储备液，使用时可以按照1:1000的比例稀释使用，即推荐使用浓度为100μg/ml。
pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo质粒(4231bp)的图谱如下：
pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| AOX1 promoter | 2..940 |
| 6×His | 992..1009 |
| AOX1 terminator | 1089..1335 |
| TEF1 promoter | 1350..1761 |
| EM7 promoter | 1769..1816 |
| BleoR | 1835..2209 |
| CYC1 terminator | 2275..2522 |
| AmpR | 2563..3423 |
| AmpR promoter | 3424..3528 |
| ori | 3563..4151 |
pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2883 pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo.pdf
pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo中没有的酶切位点包括：
| AanI | AarI | AbsI | AccIII | Acc36I | AcvI | AfeI |
| AflII | AhlI | AjuI | AloI | Aor13HI | Aor51HI | ArsI |
| AscI | AsiSI | AspI | AspA2I | AvrII | AxyI | BaeI |
| BanIII | BarI | BbeI | BbrPI | BbvCI | BcuI | BfrI |
| BfuAI | BlnI | BoxI | Bpu10I | Bsa29I | BsaAI | Bse21I |
| BseAI | BseCI | BsgI | BshVI | BsmBI | Bsp13I | Bsp68I |
| BspDI | BspEI | BspMI | BspQI | BspTI | BspXI | BssNAI |
| Bst98I | Bst1107I | BstAFI | BstAPI | BstBAI | BstENI | BstHPI |
| BstPAI | BstSNI | BstZ17I | Bsu15I | Bsu36I | BsuTUI | BtuMI |
| BveI | CciNI | Cfr42I | ClaI | CpoI | CspI | CspCI |
| DinI | Eco47III | Eco72I | Eco81I | Eco105I | EcoNI | EgeI |
| EheI | Esp3I | FalI | FspAI | HpaI | I-CeuI | I-PpoI |
| I-SceI | KasI | Kpn2I | KspI | KspAI | LguI | Mly113I |
| MreI | MroI | MspCI | NarI | Nb.BbvCI | Nb.Bpu10I | NotI |
| NruI | Nt.BbvCI | Nt.Bpu10I | Nt.BspQI | PacI | PaeR7I | PalAI |
| PaqCI | PasI | PciSI | PflFI | PI-PspI | PI-SceI | PluTI |
| PmaCI | PmlI | Ppu21I | PshAI | PsiI | PspCI | PspXI |
| PsrI | PsyI | RgaI | RruI | RsrII | Rsr2I | SacII |
| SapI | SbfI | SdaI | SfaAI | SfiI | SfoI | Sfr274I |
| Sfr303I | SgfI | SgrBI | SgrDI | SgsI | SlaI | SmiI |
| SnaBI | SpeI | SrfI | Sse8387I | SspDI | SstII | SwaI |
| TstI | Tth111I | Vha464I | XagI | XhoI | XmaJI |
pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo的单酶切位点包括：
| AatII | Acc65I | AccI | AgeI | AhdI | AleI | AlwNI |
| ApaI | BamHI | BcgI | BglII | BlpI | BmtI | BseYI |
| BsiWI | BsrGI | BssHII | BstBI | BstEII | BstXI | BtgZI |
| DraIII | EagI | Eco53kI | EcoRI | EcoRV | FseI | FspI |
| HaeII | HindIII | KpnI | MfeI | MluI | MscI | NcoI |
| NdeI | NheI | NsiI | PciI | PflMI | PmeI | PspOMI |
| PstI | PvuI | PvuII | SacI | SalI | ScaI | SexAI |
| SgrAI | SmaI | SphI | SspI | StuI | StyI | TspMI |
| XbaI | XcmI | XmaI | XmnI | ZraI |
pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo质粒可使用的测序引物序列如下：
5' AOX1 sequencing primer (855-875): 5'-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3'
3' AOX1 sequencing primer (1095-1115): 5'-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3'
pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo的全序列信息:D2883 pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo 全序列.txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D2883-1µg | pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo | 1µg |
| D2883-100µg | pAOX1-MCS-His-Amp&Zeo | 100µg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| ST1450-20mg | Zeocin (博莱霉素) | 20mg |
| ST1450-100mg | Zeocin (博莱霉素) | 100mg |
| ST1450-0.25ml | Zeocin (博莱霉素) | 20mg/ml×0.25ml |
| ST1450-1ml | Zeocin (博莱霉素) | 20mg/ml×1ml |
| D2881-1µg | pAOX1-MCS-His-Zeocin | 1µg |
| D2881-100µg | pAOX1-MCS-His-Zeocin | 100µg |
| D2882-1µg | pAOX1-α factor-MCS-His-Zeocin | 1µg |
| D2882-100µg | pAOX1-α factor -MCS-His-Zeocin | 100µg |
| D2884-1µg | pAOX1-α factor-MCS-His-Amp&Zeo | 1µg |
| D2884-100µg | pAOX1-α factor-MCS-His-Amp&Zeo | 100µg |
| D0412 | 毕赤酵母GS115甘油菌 | 200μl |
| D0413 | 毕赤酵母KM71甘油菌 | 200μl |
| D0414 | 毕赤酵母X-33甘油菌 | 200μl |
微信在线咨询
