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核酸相关> 菌种与质粒> 昆虫与酵母质粒
pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)
产品编号: D4721-100μg
产品包装:100μg
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价格: ¥ 1169.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D4721-1μg pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 1μg 888.00元
D4721-100μg pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 100μg 1169.00元

pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒)是碧云天自行研发生产的S2果蝇细胞Drosophila Schneider 2)诱导型表达质粒。本质粒与pMT/V5-His A (D4716)和pMT/V5-His B (D4719) 的区别在于多克隆位点(Multiple cloning sites, MCS)的阅读框不同,便于重组蛋白与C端V5标签和His标签的融合表达。碧云天同时提供相应的阳性对照质粒pMT/V5-His/lacZ (D4712)。

S2果蝇细胞,也称S2果蝇胚胎细胞、S2细胞、S2昆虫细胞,源自20-24小时龄的黑腹果蝇胚胎晚期的原代细胞培养物[1]。S2果蝇细胞在培养皿或培养瓶中为半贴壁细胞,在摇瓶中为悬浮细胞,无需CO2,可在室温(26-28ºC)培养,生长速度快,细胞密度高,可通过瞬时转染或稳定细胞系表达外源重组蛋白,兼容无血清培养基,已广泛用于大规模重组蛋白的生产[2]。

本质粒采用的MT启动子(The Drosophila metallothionein promoter)受重金属离子的(Zn2+, Cd2+)的严格调控,因此S2果蝇细胞可通过加入CuSO4或CdCl2瞬时高效启动外源基因表达。建议使用500-1000μM CuSO4或10μM CdCl2诱导外源基因表达。CuSO4细胞毒性低于CdCl2,CdCl2启动效率高于CuSO4 [3]。碧云天同时提供组成型Ac5启动子系列产品:pAc5.1/V5-His A (D4751)、pAc5.1/V5-His B (D4755)、pAc5.1/V5-His C (D4759)。

本质粒不带有分泌信号肽(Secretion signal peptide),如果插入基因不带有原生分泌信号肽,重组蛋白将在S2果蝇细胞内表达。如果需要重组蛋白分泌到培养基上清中,建议购买含有BiP分泌信号肽的质粒:pMT/BiP/V5-His A (D4727)、pMT/BiP/V5-His B (D4732)或pMT/BiP/V5-His C (D4735)。

本质粒的克隆插入基因应包含一个带有ATG启动密码子的Kozak翻译启动序列((G/A)NNATGG),以便正确启动重组蛋白的表达。

本质粒可与pCoPuro (D4701)、pCoBlast (D4705)或pCoHygro (D4708)共转染至S2果蝇细胞,后续通过嘌呤霉素(Puromycin Dihydrochloride) (ST551)、灭瘟素S (Blasticidin S HCl) (ST018)或潮霉素B (Hygromycin B) (ST1389)筛选得到含有目的基因的诱导型S2果蝇稳定细胞株。建议在筛选稳定细胞株之前,先通过瞬时转染测试重组蛋白能否表达。

本质粒在多克隆位点之后含有V5标签(GKPIPNPLLGLDST)和His标签(HHHHHH),便于重组蛋白的检测和纯化。

本质粒具有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌。

pMT/V5-His C质粒的图谱如下:

pMT/V5-His C质粒的主要信息如下:

Base pairs 3534
M13 Forward 379-395
MT promoter 411-833
MCS (Multiple Cloning Site) 839-925
V5 Tag 926-967
6X His Tag 977-994
SV40 poly (A) signal 1036-1170
M13 Reverse 1314-1330
lac operator 1338-1354
lac promoter 1362-1392
CAP binding site 1407-1428
ori 1716-2304
Ampicillin 2475-3335
Ampicillin promoter 3336-3440

pMT/V5-His C的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D4721 pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒).pdf

pMT/V5-His C中没有的酶切位点包括:

AarI AatI AbsI AccIII AccB7I AcvI AdeI
AfeI AflII AjuI AleI AlfI AloI Aor13HI
Aor51HI ApaI AscI AsiSI AspI AspA2I AsuNHI
AvrII AxyI BamHI BanII BanIII BarI BbrPI
BbsI BbvCI BfrI BglII BlnI BlpI BmtI
BoxI BpiI BplI Bpu10I Bpu1102I BpuAI Bsa29I
BsaAI Bse21I BseAI BseCI BsePI BshVI BsiWI
Bsp13I Bsp19I Bsp68I Bsp120I Bsp1407I Bsp1720I BspDI
BspEI BspOI BspTI BspXI BsrGI BssHII BssNAI
BssT1I Bst98I Bst1107I BstAFI BstAUI BstBAI BstDSI
BstENI BstPAI BstSNI BstV2I BstZ17I Bsu15I Bsu36I
BsuTUI BtgI BtgZI BtuMI CelII Cfr9I Cfr42I
ClaI CpoI CsiI CspI CspCI DraIII Ecl136II
Eco24I Eco47III Eco53kI Eco72I Eco81I Eco105I Eco130I
Eco147I EcoICRI EcoNI EcoT14I EcoT22I EcoT38I ErhI
FalI FriOI FseI FspAI I-CeuI I-PpoI I-SceI
KflI Kpn2I KspI MabI MauBI Mph1103I MreI
MroI MspCI Nb.BbvCI Nb.Bpu10I NcoI NheI NruI
NsiI Nt.BbvCI Nt.Bpu10I OliI PacI PalAI PasI
PauI PceI Pfl23II PflFI PflMI PI-PspI PI-SceI
PmaCI PmlI Ppu21I PpuMI PshAI Psp5II Psp124BI
PspCI PspLI PspOMI PspPPI PsrI PsyI PteI
RgaI RigI RruI RsrII Rsr2I SacI SacII
SanDI SexAI SfaAI SfiI Sfr303I SgfI SgrAI
SgrBI SgrDI SgsI SmaI SmiI SnaBI SrfI
SseBI SspBI SstI SstII StuI StyI SwaI
TspMI Tth111I Van91I Vha464I XagI XcmI XmaI
XmaCI XmaJI Zsp2I

pMT/V5-His C中的单酶切位点包括:

AatII AccI Acc65I AgeI AhdI AlwNI AvaI
BfuAI BmeT110I BmgBI BpmI BseRI BseYI BsgI
BsoBI BspMI BspQI BstAPI BstBI BstEII EcoO109I
EcoRI EcoRV HpaI KasI KpnI MfeI MluI
MscI NarI NmeAIII NotI PaeR7I PciI PfoI
PluTI PmeI PsiI PspFI PspXI SalI SapI
SbfI ScaI SfoI SpeI SspI XbaI XhoI
ZraI

pMT/V5-His C质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

M13 Forward (379-395): 5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'

M13 Reverse (1314-1330): 5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3'

pMT/V5-His C的全序列信息: D4721 pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 全序列.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D4721-1µg pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 1µg
D4721-100µg pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 100µg
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
参考文献:
1. Schneider I. J Embryol Exp Morphol. 1972. 27(2):353-65.
2. Moraes AM, Jorge SA, Astray RM, Suazo CA, Calderón Riquelme CE, et al. Biotechnol Adv. 2012. 30(3):613-28.
3. Kovach MJ, Carlson JO, Beaty BJ. Insect Mol Biol. 1992. 1(1):37-43.
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D4705-1µg pCoBlast (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) 1µg
D4705-100µg pCoBlast (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) 100µg
D4708-1µg pCoHygro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) 1µg
D4708-100µg pCoHygro (S2果蝇细胞稳定细胞株筛选质粒) 100µg
D4712-1µg pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) 1µg
D4712-100µg pMT/V5-His/lacZ (S2果蝇细胞阳性对照质粒) 100µg
D4716-1µg pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 1µg
D4716-100µg pMT/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 100µg
D4719-1µg pMT/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 1µg
D4719-100µg pMT/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 100µg
D4721-1µg pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 1µg
D4721-100µg pMT/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 100µg
D4724-1µg pMT/BiP/V5-His/EGFP (S2果蝇细胞阳性对照质粒) 1µg
D4724-100µg pMT/BiP/V5-His/EGFP (S2果蝇细胞阳性对照质粒) 100µg
D4727-1µg pMT/BiP/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 1µg
D4727-100µg pMT/BiP/V5-His A (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 100µg
D4732-1µg pMT/BiP/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 1µg
D4732-100µg pMT/BiP/V5-His B (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 100µg
D4735-1µg pMT/BiP/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 1µg
D4735-100µg pMT/BiP/V5-His C (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 100µg
D4739-1µg pMT/BiP/V5-His/CoPuro (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 1µg
D4739-100µg pMT/BiP/V5-His/CoPuro (S2果蝇细胞诱导型表达质粒) 100µg
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