碧云天生产的Fpg (Formamidopyrimidine DNA glycosylase)，即甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶，也被称作8-氧代鸟嘌呤DNA糖基酶(8-Oxoguanine DNA glycosylase)，是一种DNA损伤修复酶，可识别并切除嘌呤受损碱基。该酶具有N-糖基化酶活性，可以切下并释放双链DNA上受损的嘌呤碱基(Purine)，并产生一个脱嘌呤(Apurinic, AP)位点；同时也具有脱嘌呤位点裂解酶(AP-裂解酶)活性，可以切割AP位点的3'和5'端，因此可以除去AP位点，从而产生一个具有3'和5'磷酸的碱基缺口(Gap)。

Fpg可以识别并切除的受损碱基包括：7,8-dihydro-8-oxoguanine (8-oxoguanine) (7,8-二羟基-8-氧代鸟嘌呤(8-氧代鸟嘌呤))、8-oxoadenine (8-羟基腺嘌呤)、fapy-guanine (fapy-鸟嘌呤)、methy-fapy-guanine (甲基-fapy-鸟嘌呤)、fapy-adenine (fapy-腺嘌呤)、aflatoxin B1-fapy-guanine (黄曲霉毒素B1-fapy-鸟嘌呤)，以及5-hydroxy-cytosine (5-羟基-胞嘧啶)和5-hydroxy-uracil (5-羟基尿嘧啶)等。

DNA损伤根据其来源分为内源性和外源性两大类。大部分内源性DNA损伤来自于细胞内DNA与活性氧进行反应。外源性DNA损伤来自于环境、物理和化学因素，包括紫外线、电离辐射、烷基化试剂、交联剂。

本产品识别并切除双链DNA上受损碱基的原理请参考图1。

图1.碧云天生产的Fpg识别并切除双链DNA上受损碱基的示意图。首先，Fpg识别双链DNA上受损碱基并在其N-端糖基化酶(Glycosylase)活性作用下切下双链DNA上受损的嘌呤碱基，产生一个脱嘌呤(Apurinic, AP)位点，随后在其AP-裂解酶(AP lyase)活性作用下切割AP位点的3'和5'端除去AP位点，产生一个具有3'和5'磷酸的单碱基缺口(1nt Gap)。

本产品催化酶切含AP位点双链DNA的效果请参考图2。

图2.碧云天生产的Fpg (D6926)和国外N公司的同类产品催化酶切含AP位点双链DNA的效果图。在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司的Fpg，37ºC孵育10分钟进行裂解反应，反应完毕后立即放至冰上并加入DNA/RNA Loading Buffer (2X, for Denaturing PAGE) (R0212)，随后用尿素(7M)变性聚丙烯酰胺凝胶(15%)进行电泳分析，最终进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。裂解反应体系(20μl): 10mM Bis-Tris-Propane-HCl, 10mM MgCl2, 1mM DTT (pH 7 @ 25ºC), 100µg/ml BSA, 20pmol含AP位点的双链DNA以及1µl不同浓度的Fpg。含AP位点的双链DNA的制备方法：将第16个碱基为dU的DNA 1 (31nt)和DNA 2 (27nt)按照Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (D0251)说明书中的使用方法通过梯度降温退火形成双链DNA，随后使用Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) (D7360)、Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium) (D7362)或Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) (D7364)催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解，从而释放游离尿嘧啶产生含AP位点的双链DNA。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

用途：DNA损伤和修复研究，单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism, SNP)分析，单细胞凝胶电泳(彗星电泳)。

来源：大肠杆菌表达的重组蛋白，表达基因为fpg基因。

活性单位定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to cleave 10pmol of a 34-mer oligonucleotide duplex containing a single 8-oxoguanine base paired with a cytosine in a total reaction volume of 10μl in 1 hour at 37ºC.

纯度：无其它DNA内切酶和外切酶活性，无RNA酶活性。

酶储存溶液：20mM Tris-HCl (pH 8 @ 25ºC), 300mM NaCl, 0.5mM EDTA, 1mM DTT,200μg/ml BSA, 50% (v/v) Glycerol.

热失活：60ºC加热10分钟可使Fpg失活。

10X Fpg Buffer: 100mM Bis-Tris-Propane-HCl, 100mM MgCl2, 10mM DTT, pH 7 @ 25ºC.

Fpg (8U/µl)的蛋白浓度通常不低于0.35mg/ml，小中大包装提供的Fpg的蛋白量通常不少于17.5、87.5和350µg。

-20ºC保存，两年有效。

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

超纯水推荐使用BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。