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核酸相关> DNA操作> 内切酶与外切酶
产品编号: D7070S
产品包装:200U
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价格: ¥ 68.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7070S Recombinant DNase I (RNase-free) 200U 68.00元
D7070M Recombinant DNase I (RNase-free) 1000U 258.00元
D7070L Recombinant DNase I (RNase-free) 5000U 998.00元

Recombinant DNase I (RNase-free),即Recombinant Deoxyribonuclease I (RNase-free),中文名称为无RNA酶重组脱氧核糖核酸酶I,是一种通过毕赤酵母(Pichia Pastoris)重组表达的高质量Bovine DNase I。本产品不含RNase (RNase-free)。

DNase I,即Deoxyribonuclease I,中文名称为脱氧核糖核酸酶I,是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物,5'端为磷酸基团,3'端为羟基。DNase I活性依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNase I 可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端[1]。

用途:制备不含DNA的RNA样品;RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染;体外T7、T3、SP6等RNA Polymerases催化的RNA转录后去除DNA模板;DNase I footprinting研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(Nick translation);产生DNA随机片段文库;细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。

碧云天同时提供牛胰腺纯化的DNase I (D7073/D7076)及耐盐的Recombinant DNase I-XT (耐盐型, RNase-free) (D7072)。

本产品活性好,效果佳。碧云天的Recombinant DNase I (RNase-free)与国外同类产品Competitor N对质粒DNA的消化效果参考图1。如图所示,本产品与Competitor N相比,效果基本一致。

图1. 碧云天Recombinant DNase I (RNase-free) (D7070)消化质粒DNA的效果图。在20μl反应体系中,加入1μg质粒DNA,及相应量的本产品或Competitor N,37ºC孵育10分钟,反应完毕后立即置于冰浴,并加入3μl 100mM EDTA (pH8.0)以终止反应,加入3μl DNA上样缓冲液(6X) (D0071),在1%琼脂糖凝胶中电泳检测。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

活性定义:37ºC 10分钟内,将能够完全降解1µg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位(Unit, U)。

酶储存溶液:10mM Tris (pH7.6), 10mM CaCl2, 50% (v/v) glycerol。

Reaction Buffer (10X):100mM Tris (pH7.6), 25mM MgCl2, 5mM CaCl2

失活或抑制:加入EDTA (pH8.0)至终浓度为10mM后,65ºC加热10分钟可使DNase I失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂,达到毫摩尔/升浓度的锌离子,0.1%的SDS,DTT、巯基乙醇等还原剂,50-100mM以上盐浓度均对DNase I有显著抑制作用。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7070S-1 DNase I (1U/μl, RNase-free) 200μl
D7070S-2 Reaction Buffer (10X) 200μl
D7070S-3 100mM EDTA (pH8.0) 200μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7070M-1 DNase I (1U/μl, RNase-free) 1ml
D7070M-2 Reaction Buffer (10X) 1ml
D7070M-3 100mM EDTA (pH8.0) 1ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7070L-1 DNase I (1U/μl, RNase-free) 5ml
D7070L-2 Reaction Buffer (10X) 5ml
D7070L-3 100mM EDTA (pH8.0) 5ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,至少一年有效。

注意事项:

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. RT-PCR反应前RNA样品中DNA的去除:
a. 向一无RNA酶的EP管中依次加入下列试剂:
Reagent Volume
Ultrapure Water (9-x)µl
Reaction Buffer (10X) 1µl
RNA xµl (1µg)
DNase I (1U/µl) 1µl
注:如需处理较大量的RNA样品,可以按照比例放大上述反应体系。如果能在上述反应体系中加入适量Ribonuclease inhibitor以防止RNA降解则更佳。
b. 37ºC孵育30分钟。
c. 向上述反应体系中加入1µl 100mM EDTA (pH8.0),65ºC孵育10分钟以失活DNase I。
注:在没有鏊合剂如EDTA等存在情况下加热,RNA可被水解。
d. 上述加热处理过的RNA样品即可直接用于处理好的RNA可用作RT-PCR反应的模板。
2. 体外RNA转录后模板DNA的去除:
a. 在每含有0.5µg模板DNA的转录反应体系中加入1U DNase I。
注:在某些情况下,模板DNA完全消化所需的DNase I的量需通过实验进行摸索。
b. 37ºC孵育15分钟。
c. 酚/氯仿抽提失活DNase I。
3. 缺口平移进行DNA标记:
a. 参考如下表格设置反应体系:
Reagent Volume
Ultrapure Water (19.25-x-y)µl
Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I 2.5µl
3 dNTP Mixture (1mM each, without the labeled dNTP)* 1.25µl
[α-32P]-dNTP, ~110TBq/mmol (3000Ci/mmol) yµl (1.85-3.7MBq, 50-100µCi)
Template DNA xµl (0.25µg)
DNase I (freshly diluted to 0.002U/µl)** 1µl
DNA Polymerase I, E. coli*** 1µl (10U)
*3 dNTP Mixture (1mM each, without the labeled dNTP):分别取除已经标记的dNTP外的3种dNTP(100mM) 各1µl加入到97µl的无核酸酶的去离子水中混匀即可。例如标记的为dATP,则需混合dTTP、dCTP和dGTP三种dNTP至每种的最终浓度为1mM。配制好的dNTP可存放于-20ºC以备后续使用。
**DNase I可以用1X Reaction Buffer for DNA Polymerase I进行稀释。
Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I:500mM Tris (pH7.5), 100mM MgCl2, 10mM DTT。
***DNA Polymerase I, E. coli的用量可以在5-15U范围内适当调节。
b. 立即15ºC孵育15~60分钟。
c. 上述反应体系中加入1µl of 0.5M EDTA (pH8.0)终止反应。
d. 从中取出少量例如1µl检测标记效率。通常标记效率至少可以达到108cpm/µg DNA。
e. 可用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60去除[α-32P]-dNTP,以纯化获得标记的DNA。
4. 其它用途可以参考上述用途进行。
参考文献:
1. Suck D. J Mol Recognit. 1994. 7(2):65-70.
相关产品:
产品编号 产品名称 包装
D7070 Recombinant DNase I (RNase-free) 200/1000/5000U
D7072 Recombinant DNase I-XT (耐盐型, RNase-free) 200/1000/5000U
D7073 DNase I 200U
D7076 DNase I 1000U
D7078 Thermolabile dsDNase 50/250次
D7121 BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) 5/25/100/500/2000KU
D7126 BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) 5/25/100/500/2000KU
D7195 蛋白A-微球菌核酸酶(pA-MNase) 60/300KU
D7197 蛋白G-微球菌核酸酶(pG-MNase) 60/300KU
D7199 蛋白AG-微球菌核酸酶(pAG-MNase) 60/300KU
D7201 微球菌核酸酶(Micrococcal Nuclease, MNase) 320/1600KU
P0345 DNase活性荧光检测试剂盒 100/500次
P0346 DNase I残留检测试剂盒 100/500次
ST576 RNase A (10mg/ml, DNase free) 1ml
ST577 RNase A (100mg/ml, DNase free) 0.5ml
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