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核酸相关> DNA操作> 内切酶与外切酶
产品编号: D7072S
产品包装:200U
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价格: ¥ 82.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7072S Recombinant DNase I-XT (耐盐型, RNase-free) 200U 82.00元
D7072M Recombinant DNase I-XT (耐盐型, RNase-free) 1000U 309.00元
D7072L Recombinant DNase I-XT (耐盐型, RNase-free) 5000U 1198.00元

Recombinant DNase I-XT (耐盐型, RNase-free),即Recombinant Salt-tolerant Deoxyribonuclease I (RNase-free),简称DNase I-XT或DNase I-ST,中文名称为无RNA酶重组耐盐型脱氧核糖核酸酶I,是一种通过毕赤酵母(Pichia Pastoris)重组表达经蛋白质工程改造的高品质耐盐型DNase I。本产品不含RNase (RNase-free),特别适用于降解体外转录(In Vitro Transcription, IVT)高盐缓冲体系中的DNA模板,去除RNA样品中残留的基因组DNA。

本耐盐型DNase I与NEB公司的DNase I-XT (M0570)或Thermo公司的TURBO™ DNase (AM2238/AM2239)的原理和使用方法基本一致。碧云天同时提供非耐盐的Recombinant DNase I (RNase-free) (D7070)、DNase I (D7073/D7076)。

DNase I-XT与DNase I功能相同,可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸,消化产物5'端为磷酸基团,3'端为羟基。镁离子存在条件下,可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端[1]。

DNase I-XT比DNase I具有更高的耐盐性。当盐浓度>50mM,Recombinant DNase I (RNase-free) (D7070)的活性受到明显抑制,高盐易导致DNA降解的不彻底。当盐浓度为50-150mM,DNase I-XT表现出最佳活性,即使盐浓度高达350mM,DNase I-XT仍能维持约60%的活性(图1)。

图1. 碧云天Recombinant DNase I-XT (耐盐型, RNase-free) (D7072)比Recombinant DNase I (RNase-free) (D7070)具有更高的耐盐性。在不同NaCl浓度条件下,用DNase活性荧光检测试剂盒(P0345)检测DNase I-XT和DNase I的活性。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品活性好,效果佳。碧云天的Recombinant DNase I-XT (耐盐型, RNase-free)与国外同类产品Competitor N对质粒DNA的消化效果参考图2。如图所示,本产品与Competitor N相比,效果基本一致甚至略好。

图2. 碧云天Recombinant DNase I-XT (耐盐型, RNase-free) (D7072)消化质粒DNA的效果图。在20μl反应体系中,加入1μg质粒DNA,及相应量的本品或Competitor N,37ºC孵育10分钟,反应完毕后立即置于冰浴,并加入3μl 100mM EDTA (pH8.0)以终止反应,加入3μl DNA上样缓冲液(6X) (D0071),在1%琼脂糖凝胶中电泳检测。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

活性定义:37ºC 10分钟,将能够完全降解1µg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位(Unit, U)。

酶储存溶液:10mM Tris (pH7.6), 10mM CaCl2, 50% (v/v) glycerol。

Reaction Buffer (10X):100mM Tris (pH7.6), 500mM NaCl, 100mM MgCl2, 5mM CaCl2, 0.05% Tween-20。

失活或抑制:优先推荐酚氯仿抽提使或使用相应的柱式法抽提进行Recombinant DNase I-XT的去除;加入EDTA (pH8.0)至终浓度为15mM,再75ºC加热10分钟也可使大部分Recombinant DNase I-XT失活,但可能无法完全失活DNase I-XT,而且对于RNA样品,过量的EDTA可能会降低Mg2+浓度并影响反转录的效率,此时可能需要添加额外的Mg2+获得最大的反转录酶活性。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D7072S-1 Recombinant DNase I-XT (10U/μl) 20μl
D7072S-2 Reaction Buffer (10X) 200μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7072M-1 Recombinant DNase I-XT (10U/μl) 100μl
D7072M-2 Reaction Buffer (10X) 1ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D7072L-1 Recombinant DNase I-XT (10U/μl) 500μl
D7072L-2 Reaction Buffer (10X) 5ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,至少一年有效。

注意事项:

酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

本产品为10U/μl,如需稀释成1U/μl或其它浓度,可使用Reaction Buffer (1X)或酶储存溶液进行稀释。

DNase I-XT配套的Reaction Buffer是优化过的,仅用于DNase I-XT的反应,而不能用于非耐盐型DNase I。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 常规RNA样品中DNA的去除:
a. 在冰上向无RNA酶的EP管中依次加入下列试剂:
Reagent Volume
Ultrapure Water (9-x)µl
Reaction Buffer (10X) 1µl
RNA xµl (1µg)
DNase I-XT (1U/µl) 1µl
注1:如需处理较大量的RNA样品,可以按照比例放大上述反应体系。
注2:上述反应也可以直接加入0.1µl DNase I-XT (10U/µl)。
b. 37ºC孵育15分钟。
2. 体外转录(In Vitro Transcription, IVT)后模板DNA的去除:
a. 向20µl体外转录反应体系中加入0.2µl DNase I-XT (10U/µl)或2µl DNase I-XT (1U/µl)。
注:在某些情况下,模板DNA完全消化所需的DNase I-XT的量需通过实验进行摸索。
b. 37ºC孵育15分钟。
参考文献:
1. Suck D. J Mol Recognit. 1994. 7(2):65-70.
相关产品:
产品编号 产品名称 包装
D7070 Recombinant DNase I (RNase-free) 200/1000/5000U
D7072 Recombinant DNase I-XT (耐盐型, RNase-free) 200/1000/5000U
D7073 DNase I 200U
D7076 DNase I 1000U
D7078 Thermolabile dsDNase 50/250次
D7121 BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) 5/25/100/500/2000KU
D7126 BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) 5/25/100/500/2000KU
D7195 蛋白A-微球菌核酸酶(pA-MNase) 60/300KU
D7197 蛋白G-微球菌核酸酶(pG-MNase) 60/300KU
D7199 蛋白AG-微球菌核酸酶(pAG-MNase) 60/300KU
D7201 微球菌核酸酶(Micrococcal Nuclease, MNase) 320/1600KU
P0345 DNase活性荧光检测试剂盒 100/500次
P0346 DNase I残留检测试剂盒 100/500次
ST576 RNase A (10mg/ml, DNase free) 1ml
ST577 RNase A (100mg/ml, DNase free) 0.5ml
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