微信在线咨询
| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| D8131-1μg | pShuttle-CMV-N-Flag(腺病毒质粒) | 1μg | 888.00元 |
| D8131-100μg | pShuttle-CMV-N-Flag(腺病毒质粒) | 100μg | 1169.00元 |
pShuttle-CMV-N-FLag是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端FLag tag(FLag标签)融合蛋白的重组腺病毒包装用的穿梭质粒。本穿梭质粒构建后，需要和预转染了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株以及重组腺病毒包装细胞配合使用才能完成重组腺病毒的包装。
pShuttle-CMV-N-FLag含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5'端含有一个可以编码Flag标签的序列，因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白，可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。
本质粒为卡那霉素抗性。
重组腺病毒(Recombinant adenoviruses)是一种常见的用于在培养细胞或动物体内表达外源基因的重要工具。重组腺病毒具有感染宿主细胞范围广、感染不依赖细胞分裂、高滴度及目的基因表达水平高等特性。最常用的腺病毒载体是人类血清5型腺病毒。改造后的人类血清5型腺病毒，删除了在病毒装配过程中起关键作用的E1基因和非必须的能表达逃避宿主免疫的E3基因，E1和E3基因的删除使得重组腺病毒不能自我复制，同时给外源基因的插入提供了空间，最长可插入7.5kb的外源基因。从而提高了重组腺病毒的的安全性和可操作性。重组腺病毒的包装细胞，例如AD-293、293A、HEK293等细胞中，表达E1基因，这样就可以在这些包装细胞中正常装配重组腺病毒了。
pShuttle系列的穿梭质粒携带外源目的基因，经过Pme I线性化，随后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1(D8106)共转染到大肠杆菌BJ5183中，或者转染到已经已经预转染了pAdEasy-1质粒的BJ5183菌株(D8107)中同源重组。BJ5183菌株表达recET基因，具有很高的基因同源重组(homologous recombination)活性，使带有目的基因的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1通过末端反向重复序列同源重组，实现外源基因与腺病毒基因组的整合。将重组的携带外源基因的腺病毒质粒用Pac I线性化后转染到AD-293、293A、HEK293等重组腺病毒包装细胞中进行包装。从而制备获得高滴度、自我复制缺陷并且带有目的基因的重组腺病毒。
目的基因引入时不能含有Pme I及Pac I这两个酶切位点，如果含有该两个酶切位点的目的基因，需要对该位点进行突变方可进行基因操作。
pShuttle-CMV-N-FLag质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| left inverted terminal repeat | 1–103 |
| encapsidation signal (ES) | 183–331 |
| CMV promoter | 341–933 |
| FLag tag | 955-978 |
| multiple cloning site | 980–1028 |
| SV40 polyA | 1040–1251 |
| Ad5 right arm homology | 1256–3511 |
| Ad5 left arm homology | 3558–4441 |
| right inverted terminal repeat | 4442–4544 |
| pBR322 origin | 4752–5419 |
| kanamycin resistance ORF | 6228–7019 |
pShuttle-CMV-N-Flag质粒的图谱如下：
pShuttle-CMV-N-FLag质粒的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D8131 pShuttle-CMV-N-FLag.pdf。
pShuttle-CMV-N-FLag中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pShuttle-CMV-N-FLag)包括：
| Acc65 I | Afl II | Age I | Asc I | Asp718 |
| Blp I | BsiC I | BsiW I | BstB I | Bsu36 I |
| Cla I | Eco72 I | EcoN I | Esp I | Fse I |
| Kpn I | Nru I | Pml I | Pvu I | Sfi I |
pShuttle-CMV-N-FLag中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pShuttle-CMV-N-FLag once)包括：
| BsrGI | T`GTAC,A | 193 | HpaI | GTT|AAC | 1150 |
| SnaBI | TAC|GTA | 679 | PflMI | CCAN,NNN`NTGG | 1928 |
| NheI | G`CTAG,C | 940 | BstXI | CCAN,NNNN`NTGG | 2367 |
| NotI | GC`GGCC,GC | 945 | BbsI | GAAGAC 8/12 | 3169 |
| BamHI | G`GATC,C | 980 | BbvII | GAAGAC 7/11 | 3170 |
| HindIII | A`AGCT,T | 986 | Bst1107I | GTA|TAC | 3523 |
| EcoRV | GAT|ATC | 994 | XcaI | GTA|TAC | 3523 |
| SalI | G`TCGA,C | 998 | PmeI | GTTT|AAAC | 3544 |
| MluI | A`CGCG,T | 1004 | EcoRI | G`AATT,C | 3549 |
| BglII | A`GATC,T | 1010 | AvrII | C`CTAG,G | 4091 |
| PaeR7I | C`TCGA,G | 1016 | BspHI | T`CATG,A | 5487 |
| XhoI | C`TCGA,G | 1016 | Psp1406I | AA`CG,TT | 5886 |
| XbaI | T`CTAG,A | 1022 | RsrII | CG`GWC,CG | 6892 |
| SpeI | A`CTAG,T | 1028 | DraIII | CAC,NNN`GTG | 7239 |
| ScaI | AGT|ACT | 1033 | XmnI | GAANN|NNTTC | 7493 |
pShuttle-CMV-N-His质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
forward primer (888-907): 5´GGTCTATATAAGCAGAGCTG3´
Reverse primer (1042-1064): 5´GTGGTATGGCTGATTATGATCAG3´
pShuttle-CMV-N-His的全序列信息:pShuttle-CMV-N-FLag.txt。
腺病毒包装的具体方法和步骤可以参考如下网页:
https://www.beyotime.com/support/pShuttle.htm
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D8131-1µg | pShuttle-CMV-N-FLag | 1μg |
| D8131-100µg | pShuttle-CMV-N-FLag | 100μg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
微信在线咨询
