碧云天研发生产的BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(BeyoWB™ 30 min Western Assay Kit)，也称超快速Western检测试剂盒(Superquick Western Assay Kit)，是一种通常仅需30分钟就可以从完成转印的印迹膜到获得目的蛋白条带的超快速Western检测试剂盒。本试剂盒包含了BeyoWB™封闭液、BeyoWB™抗体稀释液、BeyoWB™ Western洗涤液、BeyoWB™ BeyoECL A液和B液。本试剂盒使用便捷，能够显著缩短封闭、一抗和二抗孵育等的时间，试剂盒中包含从封闭到化学发光所需的所有溶液，用户仅需自备一抗和二抗，转膜完成后通常30分钟内就可以得到高质量的目的蛋白Western结果，可以极大加快目的蛋白的检测速度。

本试剂盒特别适用于有使用相应一抗和二抗进行Western检测经验的情况，此时使用原有的一抗和二抗配合本试剂盒通常就能在30分钟内实现从完成转印的印迹膜到获得预期的目的蛋白条带。经实测，大多数情况下使用本试剂盒的效果优于原常规检测方法。使用本试剂盒的实际检测效果，请参考图1。图中仅展示了部分检测结果，实测对于更多的一抗和二抗，本试剂盒在绝大多数情况下都具有相近或更优的检测效果。

图1.碧云天BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(P0001)与常规Western检测效果的比较图。图中BeyoWB™为使用本试剂盒的检测效果，实验条件为：BeyoWB™封闭液封闭5分钟；BeyoWB™抗体稀释液稀释一抗(1:1000)，室温孵育15分钟，BeyoWB™洗涤液洗涤30秒3次；BeyoWB™抗体稀释液稀释二抗(1:500)，室温孵育5分钟，BeyoWB™洗涤液洗涤30秒3次；显影液为BeyoWB™ BeyoECL。Control为常规Western的检测效果，实验条件为：QuickBlock™ Western封闭液(P0252)封闭10分钟；QuickBlock™ Western一抗稀释液(P0256)稀释一抗(1:1000)，室温孵育1小时，Western洗涤液洗涤5分钟3次；QuickBlock™ Western二抗稀释液(P0258)稀释二抗(1:1000)，室温孵育1小时，Western洗涤液洗涤5分钟3次；显影液为BeyoECL Star (特超敏ECL化学发光试剂盒) (P0018A)。293T和HeLa细胞裂解液的蛋白浓度均为2mg/ml。所用一抗分别为：Histone H3 Rabbit Polyclonal Antibody (AF7104)、Phospho-MEK1 (Ser218/222) Rabbit Monoclonal Antibody (AF1786)和β-Catenin Mouse Monoclonal Antibody (AF0069)；对应的二抗分别为BeyoWB™ HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L) (P0946)和BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L) (P0948)。Western印迹成像由BeyoImager™ 600化学发光成像系统(EI600)完成，同组比较时的曝光时间相同，箭头所示为目的蛋白。如图所示，本试剂盒检测效果与常规Western相近甚至更优。对于本试剂盒和常规Western方法检测的上述印迹膜分别进行自动曝光时，本试剂盒的效果也显著优于常规Western检测方法。实际实验结果会因样品、抗体、实验条件等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，常简写为WB，是用抗体检测蛋白水平的重要方法之一[1]。常规Western检测从转膜后到获得蛋白条带通常需要3小时以上甚至过夜，影响实验效率。而碧云天的BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒，转膜后通常30分钟内就可获得目的蛋白条带，大大节约了实验时间。

本试剂盒中的BeyoWB™封闭液封闭时间仅需5分钟，总体效果显著优于传统的基于BSA (牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液。

本试剂盒中的BeyoWB™抗体稀释液针对Western进行了深度优化，可同时用于一抗和二抗的稀释，用其配制的一抗工作液孵育时间仅需15分钟，二抗工作液孵育时间仅需5分钟。本产品稀释和配制的抗体工作液，可以在4ºC保存和使用不少于1个月，并且可以重复使用。

本试剂盒中的BeyoWB™ Western洗涤液用于Western时一抗或二抗孵育后的洗涤，每次洗涤时间仅需30秒即可达到理想效果，降低背景，增强信噪比。

本试剂盒中的BeyoWB™ BeyoECL化学发光试剂，灵敏度极高、背景低、发光时间长，成像效果极优。

本试剂盒提供从封闭到化学发光所需的所有缓冲液、洗涤液和检测试剂，用户仅需自备在常规Western中使用的一抗和二抗，即可在30分钟内获得与常规Western检测相似或更优的目的条带。本系列产品还提供了包含二抗的BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(小鼠一抗用) (P0956)和BeyoWB™ 30分钟Western检测试剂盒(兔一抗用) (P0958)，用户仅需自备一抗即可。对于内参和标签蛋白，推荐使用碧云天的一系列内参蛋白和标签蛋白的超快速Western检测试剂盒，仅需10分钟就能实现从印迹膜到获得预期的目的条带。

如果需要从蛋白样品到WB目的条带的超快速方案，碧云天还研发生产了BeyoWB™ 80分钟电泳转膜与Western检测试剂盒(P0002)，电泳仅需25分钟、转膜仅需10分钟、从完成转印的膜到获得目的蛋白条带仅需30分钟，总计通常不超过80分钟就能实现从蛋白样品到目的条带。该试剂盒中组分齐全，用户仅需自备一抗、二抗、水、无水乙醇及电泳、转印和成像等常规设备即可。

如果检测的是6.6×8.5cm印迹膜，按照每次封闭需要BeyoWB™封闭液5ml、稀释一抗和二抗的BeyoWB™抗体稀释液各5ml，稀释后的一、二抗重复使用3次，洗涤液每次使用10ml，BeyoWB™ BeyoECL工作液每次需要1ml计算，本试剂盒小包装和中包装分别可以进行6次和30次的Western快速检测。如果检测的是更常见的裁切后的约2×8.5cm印迹膜，按照封闭以及一、二抗孵育液体用量为每次2ml，洗涤液用量每次4ml，发光试剂工作液用量每次0.4ml计算，小包装和中包装分别可以检测15次和75次。

-20ºC保存，一年有效。4ºC保存，至少3个月有效。BeyoWB™ BeyoECL A液和B液须避光保存。

请注意回收使用过的一抗工作液和二抗工作液。回收的一、二抗工作液可以再重复使用2次。稀释后的一、二抗工作液，包括使用过的一、二抗工作液，请4ºC保存。

回收后重复使用的一、二抗工作液，使用方法同新鲜稀释的一、二抗工作液。如果在重复使用过程中发现一、二抗工作液出现轻微混浊现象，可以10,000×g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的一、二抗工作液出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。

使用本产品，通常30分钟可得到高质量的目的蛋白Western结果，即封闭5分钟、一抗孵育15分钟、洗涤30秒3次、二抗孵育5分钟、洗涤30秒3次、BeyoWB™ BeyoECL试剂孵育30秒、成像通常0.5分钟之内。

对于6.6×8.5cm的印迹膜，推荐使用碧云天的Western洗膜盒(9.0×6.0×3.3cm) (FFX050)进行洗涤和孵育；对于裁切后的条形印迹膜，推荐使用碧云天的Western洗膜盒(5格, 14.5×9.8×3.5cm) (FFX055)进行洗涤和孵育。

如果需要更多的BeyoWB™ HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L)、BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L)、BeyoWB™封闭液、BeyoWB™抗体稀释液、BeyoWB™ Western洗涤液和BeyoWB™ BeyoECL，可以单独向碧云天订购BeyoWB™ HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L) (P0946)、BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L) (P0948)、BeyoWB™封闭液(P0950)、BeyoWB™抗体稀释液(P0951)、BeyoWB™洗涤液(P0952)、BeyoWB™洗涤液(10X) (P0953)和BeyoWB™ BeyoECL (P0955)。

个别情况，如果希望获得到更好的Western结果，可适当增加封闭、一抗、二抗孵育及洗涤的时间，并适当优化成像的曝光时间。

BeyoWB™ BeyoECL A液和B液对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。