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多肽与蛋白> 蛋白检测> 免疫沉淀
BeyoRIP™ Antibody and Primers for HuR RIP Assay
产品编号: P1821S
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价格: ¥ 989.00
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P1821S BeyoRIP™ Antibody and Primers for HuR RIP Assay 10次 989.00元

碧云天研发生产的BeyoRIP™ Antibody and Primers for HuR RIP Assay,也称HuR-RIP Validated Antibody and Primer Set、BeyoRIP™ Positive Control Kit for RIP Assay,中文名为BeyoRIP™ HuR RIP抗体和引物或BeyoRIP™ RIP检测阳性对照试剂盒,是一种用于HuR蛋白RNA免疫沉淀的试剂盒,也是一种为RIP检测提供阳性对照的抗体和引物对的试剂盒。推荐配套BeyoRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖) (P1801)或BeyoRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖磁珠) (P1805)使用。

RIP Assay Kit是一种用于通过免疫沉淀来沉淀和目标蛋白结合的RNA片段,最后用于通过PCR、qPCR或NGS等方法来检测免疫沉淀所获得的RNA片段的试剂盒。通常用于检测特定的RNA结合蛋白是否和预期的特定RNA在同一复合物中,或检测特定的RNA结合蛋白和哪些RNA结合。

本试剂盒提供阳性对照抗体HuR Rabbit Monoclonal Antibody、阴性对照抗体Rabbit IgG和阳性对照引物ACTB qPCR Primer Pair。用户可将本试剂盒与BeyoRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖) (P1801)或BeyoRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖磁珠) (P1805)联合使用,通过阳性对照BeyoRIP™ HuR Rabbit Monoclonal Antibody结合RNA结合蛋白(RNA-binding protein, RBP),然后用阳性对照引物ACTB qPCR Primer Pair、目标RNA特异引物进行qRT-PCR分析,以检测样品中是否存在目标RNA。同时,阴性对照抗体Rabbit IgG可以确保RIP反应的特异性。

HuR蛋白是一种重要的RNA结合蛋白,已被证实与许多mRNA以及非编码RNA相互作用,具有多种RNA的结合活性[1],在调控基因表达、mRNA的稳定性以及转录后的调控中发挥重要作用,在多种细胞和组织中广泛表达。本试剂盒提供的HuR Rabbit Monoclonal Antibody详细信息请参考下表。

Host Rabbit
Clonality Monoclonal
Applications WB 1:500-1:1000
IP 1:40
RIP 1:50-1:100
Cross Reactivity Human, Mouse, Rat
MW ~36kDa

注:通常5µl抗体足够进行一次RIP检测。

本试剂盒提供的阳性对照引物ACTB qPCR Primer Pair可扩增人β肌动蛋白(β-Actin, ACTB) cDNA约100bp的片段,肌动蛋白是高度保守的细胞骨架结构蛋白质。该引物为预混冻干粉,每管含正向引物(Forward primer,也称上游引物)和反向引物(Reverse primer,也称下游引物)各1nmol。

碧云天BeyoRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖) (P1801)用于BeyoRIP™ Antibody and Primers for HuR RIP Assay (P1821)的免疫沉淀效果参考图1。

图1.碧云天BeyoRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖) (P1801)用于BeyoRIP™ Antibody and Primers for HuR RIP Assay (P1821)的免疫沉淀效果图。HeLa细胞(每个免疫沉淀相当于150万个细胞量)制备成RIP裂解物,用5µl Rabbit IgG (阴性对照抗体)和5µl HuR Rabbit Monoclonal Antibody (阳性对照抗体)进行免疫沉淀,HuR Rabbit Monoclonal Antibody相对于阴性对照IgG的RNA富集程度通过BeyoRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖) (P1801)使用说明中提供的2-ΔΔCt公式计算获得。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本试剂盒用于常规的RNA免疫沉淀,每次使用5μl抗体,至少可以进行10次阳性对照样品和10次阴性对照样品的RIP实验。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
P1821S-1 HuR Rabbit Monoclonal Antibody 50μl
P1821S-2 Rabbit IgG 50μl
P1821S-3 ACTB qPCR Primer Pair 1nmol each
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,至少一年有效。

注意事项:

操作过程要严格保证无RNase污染。请戴上口罩和手套操作,尽量防止人体表面的RNase污染样品。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒或耗材呼气或说话,以防RNase污染。对于操作环境中RNase的去除,推荐使用碧云天生产的RNase and DNase Away (R0123)以去除实验桌、仪器设备表面或其它接触面上的RNase。

所用试剂和耗材都要求是RNase-free,操作时应小心,避免被污染。如果耗材可能有RNase污染,可考虑用0.01%的DEPC水溶液浸泡过夜,然后高温高压灭菌并烘干。

碧云天可提供提供的阴性对照抗体有:人IgG (A7001)、山羊IgG (A7007)、兔IgG (A7016)、小鼠IgG (A7028)、大鼠IgG (A7031)和驴IgG (A7039)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.本试剂盒提供的阳性对照抗体HuR Rabbit Monoclonal Antibody、阴性对照抗体Rabbit IgG使用方法请参考BeyoRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖) (P1801)或BeyoRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖磁珠) (P1805)。建议HuR Rabbit Monoclonal Antibody与Rabbit IgG应用于RIP检测的稀释比为1:50-1:100,即每次2.5-5μl。
2.本试剂盒提供的阳性对照引物ACTB qPCR Primer Pair为预混冻干粉,每管含正向引物(Forward primer,也称上游引物)和反向引物(Reverse primer,也称下游引物)各1nmol,共2nmol。开启本产品前,3000-8000×g离心1分钟,以防开盖时引物干粉散失。每管加入400μl超纯水,先盖好盖子颠倒混匀数次,然后离心机快速离心几秒,开盖后再轻轻吹打混匀,即得400μl 2.5μM each的Primer Mix。按20μl或25μl体系使用2μl本引物。超纯水推荐使用BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。
3.参考BeyoRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖) (P1801)或BeyoRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖磁珠) (P1805)及BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X) (D7260/D7262/D7265)、BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, 防污染型) (D7501/D7503/D7507)进行qRT-PCR分析验证。
参考文献:
1.Legnini I, Morlando M, Mangiavacchi A, Fatica A, Bozzoni I. Mol Cell. 2014. 53(3):506-14.
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