产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
R7089S | RNase HII | 250U | 298.00元 |
R7089M | RNase HII | 1KU | 958.00元 |
R7089L | RNase HII | 5KU | 3826.00元 |
碧云天生产的RNase HII,即Ribonuclease HII,中文名为核糖核酸酶HII,也称核糖核酸酶H2 (RNase H2),是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的一种基因为大肠杆菌来源的重组核糖核酸内切酶。RNase HII能够催化双链DNA分子内部嵌入的单个核糖核苷酸或核糖核苷酸链的5′端磷酸二酯键的断裂,并产生一个5′端磷酸基团和一个3′端羟基。同时,RNase HII对单链RNA以及单链RNA和单链DNA杂合双链中的RNA的切割活性极低,对dsDNA、ssDNA无切割活性[1];此外,RNase HII还可沿着冈崎片段的RNA部分在多个位点进行缺刻(Nick)切割。
与RNase HI相比,RNase HII可识别双链DNA分子中的单个核糖核苷酸并进行切割,而RNase HI不能识别双链DNA中的单个核糖核苷酸;同时,RNase HII可降解冈崎片段,而RNase HI无此活性[2]。
图1. 碧云天生产的RNase HII工作原理图。
碧云天生产的RNase HII对嵌入单个核糖核苷酸的dsDNA的切割效果请参考图2。
图2. 碧云天生产的RNase HII (R7089)对嵌入单个核糖核苷酸的dsDNA的切割效果图。使用本产品或N公司(Competitor)的RNase HII,在25µl反应体系(20mM Tris-HCl, 10mM (NH4)2SO4, 10mM KCl, 2mM MgSO4, 0.1%Triton X-100, pH8.8 @25ºC)中,加入50pmol的嵌入单个核糖核苷酸的双链DNA,以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的RNase HII,37ºC孵育30分钟进行反应,反应完毕后立即冰浴3-5分钟,并取出5μl反应产物,加入1μl DNA上样缓冲液(6X) (D0071),然后进行15%变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳(180V电泳45分钟),随后用NA-Red (EB升级换代产品,2000X) (D0128/D0130)室温染色7分钟,在紫外灯下观察实验结果。如图所示,本产品与N公司的产品相比,对嵌入单个核糖核苷酸的dsDNA具有基本一致的催化切割效果。dsDNA with a ribonucleotide (也称嵌入单个核糖核苷酸的双链DNA)是使用Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (D0251),并按照该产品说明书推荐的反应程序体系,把5'-CTCTTCAGCTCTATAGAAACCCACGCAAAGCCCTCAGCATTGG-3'和5'-GGGCTTTGCGTG(ribo)GGTTTCTATAG-3'这两条寡核苷酸链进行退火反应得到的产物,并以此退火产物为底物,进行嵌入单个核糖核苷酸的双链DNA分子的切割。不同的实验条件下获得的实际检测效果可能会略有不同,图中效果仅供参考。
用途:对掺有核糖核苷酸的聚合酶产物进行缺刻(Nick)切割;与T7核酸内切酶I一同使用,可在掺入核糖核苷酸的位点处切割产生双链断裂;降解冈崎片段或其它RNA-DNA嵌合链与DNA形成的双链中的RNA部分;区分异种同源基因;SNP检测和稀有等位基因检测;除去杂交到poly(dT)上的mRNA poly(A);在cDNA第二链合成时去除mRNA。
来源:纯化自携带编码大肠杆菌RNase HII核糖核酸内切酶基因的E.coli重组菌株。
分子量:约为20kDa (单体)。
活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme required to yield a fluorescence signal consistent with the nicking of 100 picomol of synthetic double-stranded DNA substrate containing a single ribonucleotide near the quencher of a fluorophore/quencher pair in 30 minutes at 37ºC in 1X Buffer.
纯度:不含除RNase HII之外其它种类的核糖核酸内切酶,不含外切酶。
酶储存溶液:20mM Tris-HCl, 100mM NaCl, 1mM DTT, 1mM EDTA, 50% (v/v) glycerol, pH8.8 @25ºC。
10X Reaction Buffer: 200mM Tris-HCl, 100mM (NH4)2SO4, 100mM KCl, 20mM MgSO4, 1%Triton X-100, pH8.8 @25ºC。
失活:不能进行热失活;与0.1% SDS一起孵育可使RNase HII充分失活。
包装清单:产品编号 | 产品名称 | 包装 |
R7089S-1 | RNase HII (5U/μl) | 50μl |
R7089S-2 | 10X Reaction Buffer | 300μl |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
R7089M-1 | RNase HII (5U/μl) | 200μl |
R7089M-2 | 10X Reaction Buffer | 1.2ml |
— | 说明书 | 1份 |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
R7089L-1 | RNase HII (5U/μl) | 1ml |
R7089L-2 | 10X Reaction Buffer | 6ml |
— | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存,两年有效。4ºC或室温保存,至少一周有效。
注意事项:与RNase H相比,RNase HII对RNA/DNA杂交链中RNA的酶切活性较低。
RNase HII处理冈崎片段时,优先在RNA/DNA序列交界处的核糖核苷酸处产生5′缺刻。
相比与RNA/DNA杂交链或冈崎片段,RNase HII更倾向于切割含有单个核糖核苷酸的双链DNA分子。
用于依赖于RNase HII的PCR时(rhPCR),需要使用3′端带封闭基团的DNA引物。
RNase HII在50-75ºC之间均有活性,其用量可根据不同的应用进行适当调节。
RNase HII与绝大多数的PCR,LAMP等缓冲体系兼容。
RNase HII在Mg2+浓度为1-6mM之间的缓冲体系中均可发挥活性。
RNase HII极其耐热,95ºC 15分钟活性无明显降低,不能进行热失活;反应结束后加入0.1% SDS或DNA Loading Buffer (D0071)可使其充分失活。
Reagent | Volume | Final Concentration |
dsDNA with a ribonucleotide | xμl (100pmol) | 2pmol/µl |
10X Reaction Buffer | 5μl | 1X |
RNase HII (5U/µl) | 1μl | 0.1U/µl |
Nuclease-Free Water (ST876) | (44-x)μl | - |
Total Volume | 50μl | - |
Reagent | Volume | Final Concentration |
dsDNA with a ribonucleotide | xμl (100pmol) | 2pmol/µl |
10X Reaction Buffer | 5μl | 1X |
RNase HII (5U/µl) | 1μl | 0.1U/µl |
T7 Endonuclease I (10U/µl) | 2μl | 0.4U/µl |
Nuclease-Free Water (ST876) | (42-x)μl | - |
Total Volume | 50μl | - |
图3. rhPCR (RNase HII-dependent PCR)工作原理示意图。
a. 引物设计。rhPCR的引物需设计成不能被DNA聚合酶进行延伸,且在3′末端附近含有单个核糖核苷酸。因此rhPCR的引物在设计时须符合以下三个要求:Reagent | Volume | Final Concentration |
10X BeyoTaq Buffer (with Mg2+) | 5μl | 1X |
dNTP (2.5mM each) (D7371) | 4μl | 0.2mM each |
Template DNA | xμl | 10pg-1μg*/50µl |
Primer Mixture (10mΜ each) | 4μl | 0.8μM |
RNase HII (5U/µl) | 1μl | 0.1U/µl |
BeyoTaq DNA Polymerase (5U/µl) (D7218/D7219) | 0.25μl | 0.025U/µl |
Nuclease-Free Water (ST876) | (35.75-x)μl | - |
Total Volume | 50μl | - |
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
ST576 | RNase A (10mg/ml, DNase free) | 1ml |
ST577 | RNase A (100mg/ml, DNase free) | 0.5ml |
ST578 | RNase A (10mg/ml) | 1ml |
ST579 | RNase A (100mg/ml) | 0.5ml |
D7089 | RNase H | 100U |
R7088S | RNase H | 250U |
R7088M | RNase H | 1000U |
R7088L | RNase H | 5000U |
R7089S | RNase HII | 250U |
R7089M | RNase HII | 1KU |
R7089L | RNase HII | 5KU |
R7090S | Thermostable RNase H | 250U |
R7090M | Thermostable RNase H | 1000U |
R7090L | Thermostable RNase H | 5000U |
R7090FT | Thermostable RNase H | 50U |
R7092S | RNase R | 500U |
R7092M | RNase R | 2KU |
R7092L | RNase R | 10KU |
R7096S | RNase T1 | 100000U |
R7096M | RNase T1 | 500000U |