化学信息：
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化学名
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[4-[(E)-2-(1H-indazol-3-yl)ethenyl]phenyl]-piperazin-1-ylmethanone
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简称
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KW2449
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别名
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KW 2449, KW-2449
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中文名
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N/A
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化学式
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C20H20N4O
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分子量
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332.4
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CAS号
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1000669-72-6
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纯度
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98%
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溶剂/溶解度
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Water<1mg/ml; DMSO67mg/ml; Ethanol67mg/ml
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溶液配制
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5mg加入1.5ml DMSO，或者每3.32mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SC1090-10mM用DMSO配制。
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生物信息：
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产品描述
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KW-2449是一种多靶点抑制剂，最有效作用于Flt3，IC50为6.6nM，作用于Flt3、Bcr-Abl和Aurora A适度有效；对PDGFRβ、IGF-1R、EGFR没有抑制效果。Phase 1。
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信号通路
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Angiogenesis; Protein Tyrosine Kinase
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靶点
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FLT3 (D835Y)
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Abl (T315I)
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FLT3
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Abl
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FGFR1
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IC50
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1nM
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4nM
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6.6nM
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14nM
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36nM
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体外研究
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KW-2449是FLT3、ABL、ABL-T315I和Aurora激酶的多激酶抑制剂，用于治疗白血病患者。KW-2449作用于携带FLT3突变的白血病细胞，通过抑制FLT3激酶，而有效抑制生长，导致磷酸化的-FLT3/STAT5下调，细胞周期停在G1期和细胞凋亡。KW-2449口服处理FLT3突变的移植瘤模型，显著抑制肿瘤生长，具有最低的骨髓抑制率。KW-2449作用于FLT3野生型人白血病，诱导磷酸化的组蛋白H3降低，细胞周期停在G2/M和细胞凋亡。KW-2449作用于抗Imatinib的白血病，通过同时下调BCR/ABL和Aurora激酶而释放阻力。人血浆蛋白，如α1-酸性糖蛋白，不会影响KW-2449的抑制活性。KW-2449作用于多种类型白血病，有效抑制生长。KW-2449作用于携带FLT3突变和抗Imatinib突变的白血病患者，具有显著活性，且临床研究也获得授权。KW-2449降低FLT3和STAT5的磷酸化程度，这种作用存在剂量依赖性。此外，KW-2449有效抑制ABL-T315I，IC50为4nM。另一方面，KW-2449即使浓度为1μM时，对PDGFRβ、IGF-1R、EGFR及多种丝/苏氨酸激酶没有作用效果。KW-2449作用于表达FLT3/ITD的白血病细胞和FLT3/KDM激活的以及过表达野生型FLT3的白血病细胞，都有效抑制生长。与抑制生长相一致，KW-2449作用于MOLM-13细胞，抑制FLT3(P-FLT3)及其下游分子磷酸-STAT5(P-STAT5)磷酸化，这种作用存在剂量依赖性。而且，KW-2449提高G1期百分数，而降低S期百分数导致凋亡细胞数增高。KW-2449可以使组成型活化的WT-FLT3激酶去磷酸化，而不抑制白血病细胞增殖。KW-2449迅速被吸收，并转化为一个主要的代谢产物M1。临床前期研究显示单胺氧化酶-B(MAO-B)和醛氧化酶使KW-2449转化为其主要代谢产物M1。KW-2449通过抑制FLT3/ITD而调节细胞毒性。KW-2449是FLT3抑制剂，诱导下游靶点STAT5受抑制。KW2449与HDACIs协同作用于Ph+ CML细胞，诱导凋亡，这种作用存在时间和浓度依赖性。KW2449作用于CML细胞，协同增强Vorinostat/SNDX275杀伤力。KW-2449对另外的抗IM Bcr/Abl+的白血病细胞具有活性。KW2449作用于nocodozole处理的K562细胞，适度降低组蛋白H3磷酸化，组蛋白是Aurora B活性指示剂。
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体内研究
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KW-2449口服处理给药MOLM-13移植瘤模型，处理14天，具有显著的抗癌效果，这种作用存在剂量依赖性。
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临床实验
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N/A
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特征
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Investigated as a FLT3 inhibitor in clinical trials, with others in early development.
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相关实验数据(此数据来自于公开文献，碧云天并不保证其有效性)：
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酶活性检测实验
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方法
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在PBS中冲洗白血病细胞，然后通过使细胞再悬浮在裂解液(20mM Tris pH 7.4、100mM NaCl、1% Igepal、1mM EDTA、2mM NaVO4及完整蛋白酶抑制剂KW-2449)中溶解30分钟。抽提物在1.6×104g转速下离心，得到澄清，检测上清液测定蛋白。移除50μg等分样，作为全细胞裂解液，用于分析STAT5,剩下的用于与抗FLT3抗体进行免疫沉淀反应。加入抗FLT3抗体用于抽提，温育过夜，再加入蛋白A琼脂糖，再处理2小时。测定全细胞裂解液的SDS-PAGE凝胶和免疫沉淀同时进行。转移到Immobilon膜上，使用抗磷酸抗体(4G10)进行免疫印迹，用于测定磷酸化的FLT3；使用大鼠单克隆抗体作用于磷酸化的STAT5(Y694残基)测定全部细胞裂解物凝胶，然后剥离，使用抗FLT3抗体作为二次探针，用于测量全部FLT3。通过化学发光观察蛋白，使用Kodak BioMax XAR胶片曝光，显影，然后使用Bio-Rad GS800光密度计扫描。通过剂量反应曲线的线性回归分析，测定抑制50% FLT3或STAT5磷酸化所需的KW-2449浓度(IC50)。为了分析FLT3和STAT5，收集肝素化管中的外周血，在冰上迅速冷却。样本按900g转速在4℃下离心10分钟。移除血浆，冰冻在-80℃下储存。白细胞层小心转移到冰冻PBS中，分层到冰冻的Ficoll-Hypaque上，然后按600g转速在 4℃下离心5分钟。随后所有步骤在4℃下进行。收集单层细胞，在红血细胞裂解液(0.155M NH4Cl、0.01M KHCO3、0.1mM EDTA)，中快速清洗，然后再在PBS中洗一遍。然后溶解细胞，用于分析FLT3和STAT5。
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细胞实验
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细胞系
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MOLM-13和RS4;11细胞
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浓度
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33nM、75nM、0.1μM、0.3μM、0.15μM
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处理时间
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24、48和72小时
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方法
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与KW-2449在37℃下温育72小时后，通过3'-[1-(羰基苯胺)-3,4-四氮唑]-双(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸钠水合物法测定细胞活力使用细胞增殖试剂盒II测定存活细胞数。为了分析细胞周期，使用KW-2449处理 MOLM-13和RS4;11细胞。在37℃下温育24、48和72小时后，分析DNA含量。使用KW-2449或Imatinib处理24小时后，分析K562、TCC-Y和TCC/Ysr细胞周期分布。
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动物实验
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动物模型
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CBySmn.CB17-Prkdsscid/J (BALB/C)小鼠，溶于100μl PBS的2×106 BV173/E255K/Luc cl4细胞注射到鼠尾部静脉
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配制
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溶于0.5%甲基纤维素400溶液
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剂量
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32mg/kg/day, 5 days/week
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给药方式
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口服处理
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参考文献：
1. Shiotsu Y, et al. Blood. 2009, 114(8), 1607-17.
2. Pratz KW, et al. Blood. 2009, 113(17), 3938-46.
3. Nguyen T, et al. Clin Cancer Res. 2011, 17(10), 3219-32.
包装清单：
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产品编号
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产品名称
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包装
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SC1090-10mM
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KW2449 (FLT3抑制剂)
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10mM×0.2ml
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SC1090-5mg
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KW2449 (FLT3抑制剂)
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5mg
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SC1090-25mg
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KW2449 (FLT3抑制剂)
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25mg
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说明书
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1份
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保存条件：
-20℃保存，至少一年有效。5mg和25mg包装也可室温保存，至少6个月有效。如果溶于非DMSO溶剂，建议分装后-80℃保存，预计6个月内有效。
注意事项：
本产品对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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