问：我做的是细胞毒理实验，想问下单染管的细胞需要用药吗，还是不用，直接染色就可以？小云 2022-09-13 16:51:15

碧云爱答说： 2022-09-15 16:37:36

只要保证处理后有活细胞、凋亡细胞即可，具体哪个浓度没关系，可以选个中间浓度使用

小云说： 2022-09-15 16:15:23

单染管用什么药呢，我这个药物是有浓度梯度的，应该用哪个梯度的药物呢？

碧云爱答说： 2022-09-14 10:52:39

需要用药处理

问：用流式具体怎么分析，怎么圈门？小云 2022-09-13 16:16:23

碧云爱答说： 2022-09-14 10:50:27

正常细胞不会被GreenNuc™和Annexin V-mCherry所染色，Caspase-3活性高的凋亡细胞的细胞核呈明亮的绿色荧光，凋亡细胞会被Annexin V-mCherry染成红色荧光。需要指出的是对于发生坏死(necrosis)的细胞，由于细胞膜的完整性被破坏，位于细胞膜内侧的PS也会被Annexin V-mCherry染色。本试剂盒不区分凋亡细胞和坏死细胞。除了细胞碎片外，其余细胞都圈上

问：产品简介中的图2是否需要离心？使用说明中说是需要离心，不太明白？（3.对于贴壁细胞的原位荧光显微镜检测：注：本方法的优点是可以原位观察细胞凋亡，缺点是部分凋亡由于不贴壁而检测不到。 a.选做：在凋亡诱导结束后，对于培养于24孔板、48孔板或96孔板的细胞进行离心，1000×g离心5分钟。 b.吸除细胞培养液，加入PBS洗涤一次。 c.加入194μl Annexin V-mCherry Binding Buffer。 d.加入5μl Annexin V-mCherry和1μl GreenNuc™ Caspase-3 Substrate (1mM)，轻轻混匀。 e.室温(20-25℃)避光孵育20-30分钟。可以使用铝箔进行避光。 f.随即在荧光显微镜下观察，GreenNuc™-DNA为绿色荧光(Ex/Em=500/530nm)，Annexin V-mCherry为红色荧光(Ex/Em=587/610nm)。注意：细胞在染色后须尽快完成检测，通常宜在1小时之内完成检测。）小云 2022-01-07 14:21:39

碧云爱答说： 2022-01-27 09:26:30

如果有相应的仪器条件，建议离心，避免损失凋亡细胞。