问：您好， 我这边在使用贵公司 DCFH-DA 活性氧（ROS）检测试剂盒时连续进行了两次实验，但均未能检测到有效荧光信号，因此想向贵公司咨询是否可能与试剂状态有关，并请帮忙判断原因。 【第一次实验（3月18日开封后第一次使用）】 DCFH-DA 原液于 3 月 18 日开封后立即放回 −20°C 保存，无反复冻融。实验时按说明书将 DCFH-DA 按 1:1000 用 PBS 稀释，稀释后 10 分钟内加入到细胞中（CHO 细胞，黑色透明底 96 孔板）。37°C 避光孵育 20 min 后洗 3 次，再按说明书加入 Rosup 作为阳性对照，继续孵育后立即进行荧光显微镜观察及酶标仪检测（Ex 488 / Em 525）。 结果：阳性对照孔中细胞明显受损或状态变差，但荧光显微镜几乎观察不到绿色荧光信号，酶标仪读数中阳性对照与溶剂对照基本无差别。 【第二次实验（重新优化条件后重复实验）】 第二次实验对条件进行了优化：设置 5000 个细胞/孔和 8000 个细胞/孔两种密度，细胞贴壁 24 h 后处理，再进行 DCFH-DA 染色（同样按 1:1000 稀释，37°C 避光孵育 20 min，洗 3 次），随后加入 Rosup 作为阳性对照并立即检测。 结果如下（单位为酶标仪荧光强度）： 空白对照（无细胞）：约 80,000 – 110,000，数据稳定； 阳性对照：约 85,000 – 115,000，与空白对照基本一致； 溶剂对照：大多数孔在 150,000 – 300,000 左右，个别孔出现较高值，但整体上阳性对照并未明显高于溶剂对照。 同时，在显微镜下观察时，阳性对照细胞已经明显受损或接近死亡，但仍然几乎观察不到绿色荧光信号。 【想咨询的问题】 由于试剂为刚开封、未反复冻融，且两次实验均严格按照说明书操作，但始终无法检测到有效荧光信号，因此想请教： 1）在上述情况下，是否可能是 DCFH-DA 探针本身已经失活或存在质量问题？ 2）能否换新产品试用 3）针对 CHO 细胞，DCFH-DA 和 Rosup 是否需要调整浓度或孵育时间？ 如果需要，我可以提供完整的原始数据或实验记录。 非常感谢您的帮助，期待您的回复！ 谢谢！ 小云 2026-03-23 09:38:58
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碧云爱答说： 2026-03-23 11:07:16
1. 96孔板直接用于荧光酶标仪检测，需要注意一点细胞数量是否足够，细胞量太好，各个组别的差异可能检测不出来。2.荧光显微镜拍照的图片请老师发送到info@beyotime.com邮箱。
碧云爱答说： 2026-03-12 15:06:43
倒置荧光显微镜也可以进行观察的。
碧云爱答说： 2026-01-27 10:43:12
10mM，mmol/L
碧云爱答说： 2025-12-19 16:15:20
暂无测试数据。
碧云爱答说： 2025-12-01 09:51:27
暂无合适的产品提供。
碧云爱答说： 2025-11-25 13:53:00
根据药物处理时间长短确定先装载探针还是先进行药物处理。
碧云爱答说： 2025-11-25 13:47:59
理论上是能检测的，该探针只能用于活细胞的装载。
碧云爱答说： 2025-11-21 09:37:17
活性氧探针和NO不结合。
碧云爱答说： 2025-11-10 10:52:25
可以使用，用于活细胞的装载。
碧云爱答说： 2025-11-03 10:30:44
酶标仪检测的是荧光强度，RLU