基因的表达分析通常采用转录组测序、qPCR、Northern、基因微阵列芯片等技术,尽管这些技术提供了大量信息,但这些检测方法很容易掩盖单细胞基因表达的差异性,特别是RNA在细胞内的空间分布特性,采用荧光原位杂交(Fluorescence in Situ Hybridization, FISH)的方法可以特异且高灵敏地揭示单细胞水平基因表达的空间分布情况。
碧云天研发生产的Biotin Fluorescence in Situ Hybridization Kit for RNA (Green),也称Biotin FISH Kit for RNA (Green),即生物素绿色荧光原位杂交RNA检测试剂盒,是一种通过将生物素标记的寡核酸探针(DNA或RNA)与细胞或组织中的目标RNA按碱基互补配对原理进行杂交,形成生物素标记核酸探针与目标RNA的杂交复合物,再与Alexa Fluor 488标记的Streptavidin (Streptavidin-488)结合,随后就可以在荧光显微镜下观察并确定目标RNA细胞内定位的高灵敏度检测试剂盒。
产品效果
图1.碧云天研发生产的Biotin Fluorescence in Situ Hybridization Kit for RNA (Green) (R0307)用于HeLa细胞18S rRNA的荧光原位杂交(FISH)检测效果图。图A为使用阴性对照探针1µg/ml Biotin-18S rRNA sense probe的FISH检测效果图,图B为DAPI染色效果图,图C为图A和图B的叠加图效果;图D为使用阳性生物素标记探针1µg/ml 18S rRNA Biotin FISH Probe (R0333)即Biotin-18S rRNA antisense probe的FISH检测效果图,图E为DAPI染色效果图,图F为图D和图E的叠加效果图。Scale Bar均为20µm。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。
实验流程
图2. Biotin Fluorescence in Situ Hybridization Kit for RNA (Green) (R0307)试剂盒实验流程。
*建议尽量使用新鲜样品进行FISH检测,固定后保存的样品,RNA通常会随着时间的延长而逐步发生降解,影响FISH的检测效果。
*需要自备的试剂:BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)或DEPC水(R0021/R0022)、4%多聚甲醛固定液(P0099)、PBS, pH7.3 (DNase, RNase & Protease free, Sterile) (ST477)、BSA (Fatty Acid & IgG Free, BioPremium) (ST025)、盐酸、Formamide deionized、抗荧光淬灭封片液(P0126)、多聚赖氨酸(C0312/C0313/ST508/ST509) (酌情自备)、盖玻片(FCGF24/FCGF22) (酌情自备)、冰冻或石蜡切片相关试剂(酌情自备)、目标RNA生物素探针(须自行购买或合成)。
产品特点
背景低、灵敏度高:本试剂盒提供了专门的乙酰化试剂,并且提供了单独的封闭试剂Yeast RNA (100X),能有效降低背景,提高检测灵敏度;
样品适用范围广:本试剂盒可用于多聚甲醛或福尔马林固定的组织、石蜡或冰冻切片以及细胞等样本的靶RNA的定位分析。本试剂盒适用于样品的异质性(sample heterogeneity)检测,非编码RNA (包括miRNA和lncRNA等)的单细胞水平的高灵敏度检测,基因组来源RNA的追踪检测以及目标RNA的高通量单细胞定量检测(high-through single-cell quantitation);
可以提供目标RNA的单细胞空间分布信息:采用本试剂盒可以特异且高灵敏地揭示单细胞水平基因表达的空间分布情况;
兼容后续荧光染色:本试剂盒具有较好的荧光兼容性,除特异杂交的荧光信号外,还可以配合DAPI (C1002/C1005/C1006), Hoechst 33342染色液(C1025/C1026), Hoechst 33258染色液(C1017/C1018), Propidium Iodide (ST511/ST512)等荧光染料。
产品信息:
产品编号 | 产品名称 | 包装 | 产品价格 |
R0307S | Biotin Fluorescence in Situ Hybridization Kit for RNA (Green) | 100次 | |
R0307M | Biotin Fluorescence in Situ Hybridization Kit for RNA (Green) | 500次 | |
R0306S | Fluorescence in Situ Hybridization Kit for RNA | 100次 | |
R0306M | Fluorescence in Situ Hybridization Kit for RNA | 500次 | |
R0312-100μg | 18S rRNA Cy3 FISH Probe | 100μg | |
R0312-20μg | 18S rRNA Cy3 FISH Probe | 20μg | |
R0323-100μg | U6 snRNA Cy3 FISH Probe | 100μg | |
R0323-20μg | U6 snRNA Cy3 FISH Probe | 20μg |