质粒中量抽提试剂盒

 产品编号: D0018
 产品包装: 50次
 产品价格: 326.00元
说明书下载
加入购物车

产品简介

产品简介:

产品编号 产品名称 产品包装 产品价格

D0018

质粒中量抽提试剂盒

50次

326.00元

    碧云天的质粒中量抽提试剂盒(Plasmid Midi Preparation Kit)是一种用于从大肠杆菌中进行中量质粒的快速抽提的试剂盒。
    本试剂盒采用了一种新型的离子交换柱。在特定条件下,使质粒能在离心过柱的瞬间,结合到质粒纯化柱上,在一定条件下又能将质粒充分洗脱,从而实现质粒的快速纯化。无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,12个样品只需不足60分钟即可完成。
    两步过柱纯化,使质粒纯度进一步提高,达到转细胞级要求。
    无需高速冷冻离心机,只需普通台式高速离心机。所有操作均可在1.5ml离心管中完成。
    每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限约为50微克。每个纯化柱可用于抽提5-10毫升用LB培养过夜的大肠杆菌。抽提所得质粒的OD值一般在1.80左右。抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。抽提获得的质粒DNA的OD值也会因菌种不同等原因而略有波动。
    由本试剂盒所得质粒可直接用于转染细胞,DNA测序,PCR,基于PCR的突变,体外转录,转化细菌,内切酶消化等。本试剂盒抽提的含Firefly luciferase 或Renila luciferase报告基因的质粒,用Lipofectmine 2000或Fugene 6转细胞,报告基因检测结果表明仅0.5微克受SV40启动子控制的质粒转化12孔板内的一孔原代贴壁细胞,总RLU值约为五百万,测定时间为10秒。
    内毒素(endotoxin)含量低。用对内毒素敏感的细胞转染受内毒素响应的报告基因质粒,与Qiagen昂贵的Endotoxin Free大抽试剂盒相比,检测结果完全一致。
包装清单:

产品编号

产品名称

包装

D0018-1

溶液I (悬浮液)

45ml

D0018-2

溶液II(裂解液)

45ml

D0018-3

溶液III (结合液)

60ml

D0018-4

溶液IV (洗涤液)

36ml (第一次使用前加入54ml无水乙醇)

D0018-5

溶液V (洗脱液)

15ml

D0018-6

溶液VI (DNA纯化结合液)

35ml

D0018-7

RNase A (100mg/ml)

45μl

D0018-8

中抽质粒纯化柱及废液收集管

50套

说明书

1份

保存条件:
    
室温保存,一年有效。
注意事项:

    第一次使用前把试剂盒提供的RNase A全部加到溶液I(悬浮液)中,混匀,并在瓶上做好标记。加入RNase A后4℃存放。
    第一次使用前在每瓶溶液IV(洗涤液)中加入54ml无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
    温度较低时,溶液II和溶液III可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀,37℃水浴加热溶解,混匀后使用。溶液II请勿过分剧烈混匀,否则会产生大量气泡。
    溶液II使用完后,一定要盖紧瓶盖,防止被空气中二氧化碳酸化。
    溶液II有强碱性,溶液II和溶液III对人体都有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护。
    本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
    废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明

使用说明:
1. 取过夜菌至3个1.5毫升离心管中,5000g离心1分钟收集细菌沉淀,弃上清。再重复一次,每
   管共收集3毫升过夜菌沉淀。

    通常大抽杆菌宜用LB培养过夜(16小时左右)至OD值为2-4。建议5000g(通常为5000rpm左右)室温离心
    1分钟,如沉淀不充分则适当延长离心时间。时间过长或离心速度过快会使沉淀过于紧密,不利于加
    入溶液I后散开沉淀。直接倒掉上清,再倒入约1.5毫升菌液并重复上述操作,然后倒置于吸水纸上
    (可用普通草纸),使液体流尽。如果细菌密度明显偏低,可考虑使用更多菌液,再重复上述操作1-2
    次。对于高拷贝质粒所用菌量每管一般不能超过5毫升,对于低拷贝质粒所用菌量每管一般不能超过
    10毫升。过量的菌会导致后续的裂解不充分。
2. 每管加入250微升溶液I,重悬细菌沉淀。确保沉淀完全散开,无可见细菌团块。
    确认溶液I中已经添加了RNase A。最高速度vortex 5-10秒或更长时间,悬起沉淀。一定要充分混
    匀,对着光亮处观察应呈均匀的悬浊液,无明显细菌团块或絮块。如果没有vortex,可以用枪吹打
    沉淀使沉淀逐渐散开或用手指把沉淀弹开。
3. 每管加入250微升溶液II,轻轻颠倒离心管4-6次,使细菌完全裂解,溶液透明。
    切勿vortex!vortex或其它剧烈操作会导致基因组DNA断裂,易导致最终所得质粒被基因组DNA污
    染。颠倒4-6次后,溶液应变得透明,无团块或絮状物。如果加入溶液I后细菌没有完全散开,那么
    颠倒4-6次后,可能还会有团块或絮状物。遇到有少量团块或絮状物产生的情况,可以增加颠倒次数
    3-5次,再室温放置2-3分钟,但总裂解时间不可超过5分钟。
4. 每管加入350微升溶液III,随即颠倒离心管4-6次混匀,可见白色絮状物产生。
    切勿vortex!颠倒次数也不宜过多,否则易导致最终所得质粒的质量下降。
5. 最高速(13,000rpm左右)室温离心10分钟。
    离心后会产生白色沉淀。离心时准备好下一步需使用的质粒纯化柱,废液收集管,并在纯化柱上做
    好标记。
6. 将上一步骤离心后的上清倒入或吸入到质粒纯化柱内。最高速离心30-60秒,倒弃收集管内
   液体。再重复两次,使三管质粒结合于同一纯化柱上。

    质粒倒入质粒纯化柱后,可以不用等待,直接离心。倒弃收集管内的液体后,保留收集管继续使
    用。
7. 在质粒纯化柱内加入750微升溶液IV,最高速离心30-60秒,洗去杂质,倒弃收集管内液体。
    加入溶液IV后可以不用等待,直接离心。倒弃收集管内的液体后,保留收集管继续使用。
8. 最高速再离心1分钟,除去残留液体并使痕量乙醇完全挥发。
    注意:倒弃收集管内液体后再离心,才能彻底去除微量的溶液IV。微量的溶液IV会影响质粒的质
    量。
9. 将质粒纯化柱置于1.5毫升离心管上,加入120微升溶液V至管内柱面上,放置1分钟。
    溶液V需要直接加至管内柱面中央,使液体被纯化柱吸收。如果不慎将溶液V沾在管壁上,一定要震
    动管子,使液体滑落到管底,以被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或MiliQ级纯水替代溶液V,但是水
    的pH应不小于6.5。溶液V加入后放置时间稍长,对于增加质粒产量会略有帮助。
10. 最高速离心1分钟,所得液体中加入600微升溶液VI,混匀后加到原质粒纯化柱内。
    加入溶液VI后必须混匀!可vortex或颠倒混匀,混匀后切勿离心。
11. 最高速离心30-60秒,倒弃收集管内液体。
12. 在质粒纯化柱内加入750微升溶液IV,最高速离心30-60秒,洗去杂质,倒弃收集管内液
    体。

    加入溶液IV后可以不用等待,直接离心。倒弃收集管内的液体后,保留收集管继续使用。
13. 最高速再离心1分钟,除去残留液体并使痕量乙醇完全挥发。
    注意:倒弃收集管内液体后再离心,才能彻底去除微量的溶液IV。微量的溶液IV会影响质粒的质
    量。
14. 将质粒纯化柱置于1.5毫升离心管上,加入120微升溶液V至管内柱面上,放置1分钟。
    用1.5毫升离心管作为收集管。溶液V需要直接加至管内柱面中央,使液体被纯化柱吸收。如果不慎
    将溶液V沾在管壁上,一定要震动管子,使液体滑落到管底,以便被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或
    MiliQ级纯水替代溶液V,但是水的pH应不小于6.5。溶液V加入后放置时间稍长,对于增加质粒产量
    会略有帮助。如想得到较高浓度的质粒,可以加入80微升溶液V洗脱。
15. 最高速离心1分钟,所得液体即为转细胞级超纯质粒。
    通常所得质粒浓度为0.1-0.3mg/ml左右。如果想得到高浓度的质粒,可以采用常规的乙醇沉淀方法
    浓缩质粒。

产品图片

 


相关产品


    

 

 

  

  相关产品请点击如下按钮:

 

质粒抽提

         



相关论文

使用本产品的文献:
1. Jing RR, Cui M, Sun BL, Yu J, Wang HM.
   Tissue-specific expression profiling of receptor for advanced glycation end products and
   itssoluble forms in esophageal and lung cancer.

   Genet Test Mol Biomarkers. 2010 Jun;14(3):355-61.
2. Yongjin J. Zhou, Fan Yang, Sufang Zhang, Haidong Tan and Zongbao K. Zhao
   Efficient gene disruption in Saccharomyces cerevisiae using marker cassettes with long h
   omologous arms prepared by the restriction-free cloning strategy

   WORLD JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY,2011, 27(12),2999-3000
3. Zhou Y, Wang L, Yang F, Lin X, Zhang S, Zhao ZK
   Determining the extremes of the cellular NAD(H) level by using an Escherichia
   coliNAD(+)-auxotrophic mutant.

   Appl Environ Microbiol. 2011 Sep;77(17):6133-40.




苏ICP备06009238号