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细胞相关> 细胞组织染色> 普通染色
福尔根DNA染色试剂盒
产品编号: C0129M
产品包装:5000次
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价格: ¥ 996.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C0129S 福尔根DNA染色试剂盒 1000次 236.00元
C0129M 福尔根DNA染色试剂盒 5000次 996.00元

碧云天研发生产的福尔根DNA染色试剂盒(Feulgen DNA Staining Kit),也称富尔根染色试剂盒或孚尔根染色试剂盒,是一种通过Schiff试剂和固绿染色液分别对细胞核和细胞质染色的试剂盒,是特异性显示DNA分子的形态学方法。本试剂盒适用于细胞样品和组织的石蜡切片或冰冻切片。

脱氧核糖核酸(DNA)是染色体的主要成分,福尔根DNA染色法是基于Schiff试剂反应以检测DNA的一种经典的组织化学法[1]。Schiff试剂,也称雪夫试剂或希夫试剂,即品红亚硫酸试剂,含碱性品红和亚硫酸,碱性品红与亚硫酸结合后,失去醌式结构而生成无色品红。本试剂盒染色原理如下。DNA经温和的弱酸(如盐酸)水解后,嘌呤与脱氧核糖间的糖苷键被打断而游离出醛基。Schiff试剂中的无色品红与醛基结合,醌式结构恢复,生成一种带紫红色的碱性衍生物,使DNA呈紫红色。虽然RNA的嘌呤也可以通过酸水解去除,但只有脱氧核糖的醛基可以与Schiff试剂反应,而且RNA经弱酸处理后会分解,所以本染色法仅染色DNA,不会染色RNA [1]。

经本试剂盒染色后,DNA呈紫红色,可在普通光学显微镜下清晰地显示DNA的染色深浅及其分布(如聚集于核膜、核仁四周及散在核内)。在细胞增生的病变的组织(肿瘤、肉芽组织)中,可观察到由于细胞增殖旺盛、DNA合成增加而呈现的细胞核肥大或核深染。本试剂盒同时提供固绿染色液,固绿(Fast Green)是一种酸性染料,主要与嗜酸性的细胞质结合而呈现绿色或蓝色,可清晰地区分细胞核和细胞质。本试剂盒染色后的结果见下表:

Samples Color
Ferric iron (Fe3+) Blue
Nuclei Red
Background Pink

本试剂盒染色灵敏度高、背景低、着色清晰分明。本试剂盒用于大鼠肝脏石蜡切片染色的效果图参考图1。

图1.碧云天福尔根DNA染色试剂盒(C0129)用于大鼠肝脏石蜡切片染色效果图。如图所示,经本试剂盒染色后,大鼠肝脏细胞细胞核DNA呈紫红色,细胞质呈绿色。实际染色效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中效果仅供参考。

按照使用说明推荐用量,即每张切片使用50μl染色液体系计算,本试剂盒小包装和中包装可以进行1000次和5000次染色;如果每个切片使用100μl的染色液,则小包装和中包装可进行500次和2500次染色。其它用量的情况,相应包装试剂盒的使用次数相应变动。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C0129S-1 Schiff试剂 50ml
C0129S-2 弱酸溶液(首次使用前须加入4ml浓盐酸) 46ml
C0129S-3 亚硫酸盐溶液(12X) 50ml
C0129S-4 固绿染色液 50ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
C0129M-1 Schiff试剂 250ml
C0129M-2 弱酸溶液(首次使用前须加入20ml浓盐酸) 230ml
C0129M-3 亚硫酸盐溶液(12X) 250ml
C0129M-4 固绿染色液 250ml
说明书 1份
保存条件:

4ºC保存,一年有效。Schiff试剂须避光保存。弱酸溶液、亚硫酸盐溶液(12X)和固绿染色液也可以室温保存。

注意事项:

需用户自备的试剂:36-38%浓盐酸、脱蜡剂(推荐环保脱蜡剂(二甲苯替代品) (ST975))、封片剂、乙醇、蒸馏水、免疫组化笔(推荐Liquid Blocker Super PAP Pen (免疫组化笔) (P0139))。

弱酸溶液在首次使用前必须加入指定量的36-38%的浓盐酸,并混匀后使用。浓盐酸有强腐蚀性,使用时务必做好防护。

常用固定液除Bouin氏液外均适用。用Bouin氏液固定的组织,会引起弱酸过度水解,因此不宜使用。

细胞核的染色结果的深浅会直接影响染色的效果,而细胞核染色深浅的影响因素除了与固定液和Schiff试剂的效价有关外,最为重要的是弱酸水解的程度,弱酸水解时间过长或者过短都会造成核的颜色变浅。通常的组织都以8分钟的水解时间为佳,如果结果不理想,可以尝试缩短到5分钟或者延长到10到15分钟。

理想的Schiff试剂接近无色,如果试剂颜色显轻微粉红色尚可使用,若试剂呈明显的红色则弃用。

Schiff试剂对人体有害或刺激性,对人体有呼吸道、生殖等特定器官毒性,或致畸致毒癌性,操作时请特别小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

固绿染色液复染需控制染色时间,染色时间过长会导致细胞质颜色太深,可能会遮盖阳性结果。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.需要用户自己准备的试剂。
二甲苯或碧云天的环保脱蜡剂(二甲苯替代品) (ST975),和封片剂(如碧云天的中性树胶(镜检用永久封片剂) (C0173)或加拿大树胶(镜检用永久封片剂) (C0174)等其它封片剂)及70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、无水乙醇。
2.样品处理。
a.对于石蜡切片。
二甲苯中脱蜡5-10分钟,推荐使用环保脱蜡剂(二甲苯替代品) (ST975)替代二甲苯进行脱蜡。
换用新鲜的二甲苯,再脱蜡5-10分钟。
无水乙醇5分钟。
90%乙醇2分钟。
80%乙醇2分钟。
70%乙醇2分钟。
蒸馏水2分钟。
b.对于冰冻切片。
蒸馏水洗涤2分钟。
c.对于细胞样品。
70%乙醇2分钟。
蒸馏水洗涤2分钟。
后续操作适当参考切片样品。
3.弱酸水解。
取适量弱酸溶液置于60ºC的烘箱中预热。切片用常温的弱酸溶液稍稍润洗后放入已预热好的弱酸溶液中于60ºC烘箱中水解8分钟。取出切片用常温的弱酸溶液稍稍润洗一下,蒸馏水洗3遍,每次1分钟。
注1:需控制弱酸水解的时间。
注2:若此步骤的60ºC更改为室温,即可作为阴性对照。
4.Schiff试剂染色。
使用Liquid Blocker Super PAP Pen (免疫组化笔) (P0139)圈出组织样品,在切片上滴加50μl Schiff试剂覆盖组织样品,避光染色60-90分钟,不水洗。
注:根据切片的实际大小情况,可滴加50-200μl的染色液,本使用说明以50μl为例。
5.亚硫酸盐溶液漂洗。
取2ml亚硫酸盐溶液(12X)加入20ml蒸馏水中,混匀后,再加入2ml弱酸溶液,充分混匀,即得亚硫酸盐溶液(1X)。将切片直接放入亚硫酸盐溶液(1X)中漂洗2次,每次2分钟。注:亚硫酸盐溶液(1X)须现用现配。
6.固绿染色液染色。
a.切片浸入固绿染色液染色5秒-1分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。
b.浸蒸馏水中冲洗去多余的染色液,约5分钟。
7.脱水、透明、封片。
a.切片依次浸入70%乙醇10秒,80%乙醇10秒,90%乙醇10秒,无水乙醇10秒。二甲苯透明5分钟,换新鲜的二甲苯,再透明5分钟。
b.用中性树胶(镜检用永久封片剂) (C0173)或加拿大树胶(镜检用永久封片剂) (C0174)封片封片。
c.在显微镜下观察和拍照。
参考文献:
1.Mello MLS, Vidal BC. Acta Histochem. 2017. 119(6):603-609.
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