碧云天的Mouse IL-12 p70 ELISA Kit (Mouse Interleukin-12 p70 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠白细胞介素12 p70酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-12 p70的ELISA试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为34.4pg/ml，与小鼠IL-12 p35、IL-12 p40 monomer、IL-12 p40 dimer、IL-23，人IL-12 p70、IL-12 p35、IL-12 p40 monomer和猫IL-12 p70等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
白细胞介素12 (Interleukin-12, IL-12)，又称自然杀伤细胞刺激因子(Natural Killer Cell Stimulatory Factor, NKFS)，是一种分子量在70-75kDa之间的异质二聚体糖蛋白，所以称为IL-12 p70。IL-12 p70由两个分子量分别为35kDa (p35)和40kDa (p40)的亚基通过二硫键相连，两个亚基间不具有氨基酸同源性。成熟的p35亚基氨基酸长度为196，包含7个半胱氨酸残基和一个N连接的潜在糖基化位点，成熟的小鼠p35亚基与人和大鼠p35亚基分别具有63%和86%的氨基酸同源性。成熟的p40亚基氨基酸长度为313，含有13个半胱氨酸残基和5个N连接的潜在糖基化位点，成熟的小鼠p40与人和大鼠p40具有72%和93%的氨基酸同源性。p35亚基与血细胞生成素具有一定的相似性，p40则与血细胞生成素受体的N端区域具有很大的相似性，这提示IL-12也许是和IL-6/s IL-6R复合物类似的一种细胞因子-受体复合物。小鼠p40能够以单体、同源二聚体的形式存在，也能够与p35亚基组成IL-12或者是与p19亚基组成IL-23。虽然IL-12通常被认为是一种分泌型分子，但目前在小鼠和人的细胞上都发现了膜绑定的IL-12分子。能够产生IL-12的细胞主要有1巨噬细胞、树突状细胞、单核细胞、朗格汉斯细胞、中性粒细胞、角质细胞、浆细胞样树突状细胞、小神经胶质细胞、小鼠CD8+树突状细胞和人(CD38-CD44+) B细胞。
小鼠IL-12的高亲和受体由两个I型跨膜糖蛋白组成。Rα1亚基分子量在100kDa，主要与p40亚基结合；Rα2分子量为130kDa，与Rα1没有明显的序列相似性，主要参与信号传递，与p35和p40之间的二硫键相连。无论是同源二聚体形式的p40，还是IL-23都能够与IL-12R结合，但不产生任何生物活性，二者均属于IL-12的拮抗剂。p40同源二聚体还能与Rα1结合，激活小神经胶质细胞和巨噬细胞。
IL-12能够增强细胞因子活性，还能诱导NK细胞、T细胞、树突状表皮T细胞和巨噬细胞产生IFN-γ。IL-12与其他IL-12家族成员一起还能够促进CD4+ Th1细胞在免疫应答中发挥作用。在机体发生感染时，IL-27最先被分泌并促进Th0细胞向Th1细胞分化，随后在IL-12协助下产生Th1效应细胞。
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中小鼠IL-12 p70的浓度，其原理见图1。小鼠IL-12 p70特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠IL-12 p70会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠IL-12 p70抗体后，生物素化抗小鼠IL-12 p70抗体与小鼠IL-12 p70结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠IL-12 p70浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中小鼠IL-12 p70浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

保存条件：
标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外，试剂盒其它组分严禁冻存。
注意事项：
由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分，即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也不能混用。多个试剂盒同时检测时，请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分。
充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
加样过程中须避免气泡的产生。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。