碧云天研发生产的人端粒长度染料法qPCR检测试剂盒，即Human Telomere Length SYBR Green qPCR Kit，也称人端粒长度染料法qPCR试剂盒、端粒相对长度检测试剂盒、Human Telomere Length qPCR Kit with SYBR Green，是一种通过染料法qPCR (Quantitative PCR)扩增端粒与内参基因DNA，并快速、高效、灵敏地定量不同人类样品的端粒相对长度的试剂盒。本产品为防污染型，含有优化比例的高品质UDG酶和dUTP，可有效消除PCR扩增过程中带来的产物污染问题造成的假阳性或CT值偏低。

端粒(Telomere, Tel)是真核生物染色体末端的由短串联DNA重复序列(TTAGGG)及其相关蛋白组成的保护性复合物。随着细胞分裂的进行，端粒的长度也会随之缩短。端粒极短的细胞就会进入衰老状态，这是一种不可逆的细胞生长停滞状态。因此，端粒的长度可作为判断细胞是否进入衰老状态的重要标志[1]。端粒可以作为受环境暴露和生活经历累积影响的生物标志物，也是重大疾病的风险因素[2]。越来越多的证据表明，端粒缩短对健康状况有负面影响，并与包括衰老和癌症在内的许多健康问题有关。因此，端粒长度的量化在细胞生物学研究的许多方面具有重要意义，包括染色体不稳定性、DNA修复、衰老、细胞凋亡、细胞功能障碍和致癌等[3]。

本试剂盒提供了qPCR实验所需的预混液BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG)和特异性引物，预混液包含了BeyoFast™ Taq DNA Polymerase、UDG酶、PCR Buffer、dNTPs、dUTP、SYBR Green I荧光染料、稳定剂和镁离子等所有的通用组分。本试剂盒设计了两对引物，一对是基于端粒重复序列设计的端粒引物(Telomere Primer Mix)；一对是基于12号染色体上编码酸性核糖体磷酸蛋白(Acidic ribosomal phosphoprotein, PO)的单拷贝基因(Single copy reference, SCR)而设计的内参引物(Control Primer Mix)，用于数据的均一化定量。

本试剂盒检测灵敏，扩增效率高，所用引物组检测1.25-20ng/μl范围内的基因组DNA样品时，扩增效率可达95%。不同浓度梯度的HeLa细胞基因组DNA分别使用Telomere Primer Mix和Control Primer Mix扩增，并绘制标准曲线。结果显示两个标曲均呈现良好的线性关系，表明本试剂盒具有稳定的扩增效果，端粒相对长度定量准确度高。使用Telomere Primer Mix的扩增曲线及标准曲线可参考图1，使用Control Primer Mix的扩增曲线及标准曲线可参考图2。

图1.碧云天人端粒长度染料法qPCR检测试剂盒(D8025)中Telomere Primer Mix对于不同浓度梯度的HeLa细胞基因组DNA的扩增曲线及标准曲线。NTC, No Template Control。实测数据可能会因样品、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。注：由于端粒序列的串联重复特性，端粒引物组可能在NTC中形成微量的引物二聚体。NTC组Ct值为28或更大就表示反应中有引物二聚体的形成，可以作为阴性结果处理。

图2.碧云天人端粒长度染料法qPCR检测试剂盒(D8025)中Control Primer Mix对于不同浓度梯度的HeLa细胞基因组DNA的扩增曲线及标准曲线。NTC, No Template Control。实测数据可能会因样品、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒提供了Low ROX和High ROX，广泛兼容于无需ROX和需要Low ROX或High ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。ROX的作用是用于校正与PCR无关的荧光波动，从而最大限度减少孔间差异。这种差异可能由多种因素引起，如移液误差及样品蒸发等。不同的荧光定量PCR仪对ROX的要求不同，请根据实际所用仪器在配制反应体系时选择添加高浓度ROX (High ROX)、低浓度ROX (Low ROX)或不加ROX。常用仪器所需ROX类型请参考如下表格。

本试剂盒如果用于常规的96孔板qPCR检测(建议反应体系为20µl)或384孔板qPCR检测(建议反应体系为10µl)，本产品小包装分别可以进行50次和100次检测，中包装分别可进行200次和400次检测。

-20ºC保存，一年有效。其中BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG)、Low ROX (50X)、High ROX (50X)须避光保存，并尽量避免反复冻融。

使用前请务必确保试剂完全融化，充分混匀后使用。混匀过程尽量避免产生气泡。

BeyoFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X, UDG)、Low ROX (50X)、High ROX (50X)中含有荧光染料，保存本产品或设置PCR反应体系时应避免强光照射，以尽量避免荧光淬灭问题。

经测试，本产品反复冻融10次对使用效果无显著影响，但仍需尽量避免反复冻融。反复冻融可能使产品性能下降。

qPCR检测是超高灵敏度的检测，请尽量在标准的PCR实验室中进行检测。PCR反应设置区域须尽量避免各种可能的扩增产物的污染。虽然本产品为防污染型，但仍建议勿在PCR反应设置区域撕开PCR封板膜或打开PCR管盖，PCR产物宜密封后按扩增后产物要求处理，以避免超高浓度的PCR产物污染实验环境。

建议使用带滤芯的吸头配制PCR体系，这样可以最大限度的避免污染导致的假阳性。推荐BeyoGold™无菌滤芯盒装吸头(FTIP631/FTIP635/FTIP638)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。