TEV Plus Protease (GST/His-tag)是一种在大肠杆菌中重组表达的同时带有GST标签和His标签(6X His tag)的高特异性、高活性和高稳定性的烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus, TEV)的半胱氨酸蛋白酶，能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser，并在Gln和Gly/Ser氨基酸残基之间进行酶切，常用于去除融合蛋白的Glutathione S-transferase (GST)、His或者其它标签的蛋白酶。本产品的用途和用法与TEV Protease (GST/His-tag) (P2310)一致，识别和酶切的多肽序列也完全一致。

TEV Plus Protease (GST/His-tag) 经过优化改造，与TEV Protease (His-tag) (P2307)以及TEV Protease (GST/His-tag) (P2310)相比，具有更好的位点识别特异性、更高的酶活性、更高的稳定性以及较低的酶自切割活性。

建议把GST或His等标签设计在融合蛋白的N端，并在GST或His等标签与目的蛋白之间设计加入TEV Plus Protease专一性识别与酶切的上述七肽序列。这样在GST或His标签被酶切后，在目的蛋白的N端仅有一个额外的Gly/Ser氨基酸残基，从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。构建含有TEV Plus Protease专一性识别位点的目的蛋白表达质粒，可以考虑选购碧云天的质粒pET-N-His-TEV (D2905)。

TEV Plus Protease的最佳酶切温度是30ºC，在29-34ºC范围内均具有较高的酶活性，但当温度达到或高于37ºC时，其酶活性会急剧下降。在实际操作过程中，为尽量保留目的蛋白的结构和生物活性，建议在4ºC用TEV Plus Protease酶切过夜。TEV Plus Protease在pH6.0-9.0范围内具有活性，而当pH小于或等于5时，会失去酶活性。

TEV Plus Protease还有一个突出的优点是在400mM咪唑中仍有较高活力，因此对于很多用镍柱纯化的His标签目的蛋白，可直接将TEV Plus Protease加入含高浓度咪唑的刚刚纯化的目的蛋白溶液中，在4ºC边透析去除咪唑边进行酶切。当然也可以在透析后再用TEV Plus Protease进行酶切以去除His标签。经过酶切的目的蛋白，溶液中带有His标签的本TEV Plus Protease以及切除下来的His标签，都可以通过与镍柱结合而去除。His标签蛋白的纯化可以考虑选购碧云天的BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)以及碧云天的BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)或His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229)。

TEV Plus Protease的酶活性不会被常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor)如PMSF、AEBSF、bestatin、pepstatin、E-64、TLCK和EDTA所抑制。但靶向半胱氨酸(Cysteine)残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等，可以显著抑制TEV Plus Protease的酶活力，因为天然的TEV Plus Protease含有其维持酶活力所必需的Cys151。

碧云天TEV Plus Protease (GST/His-tag)比较适用于酶切带His标签的蛋白，因为酶切后没有完全酶切的重组蛋白、切除下来的His标签以及TEV Plus Protease (GST/His-tag)都可以结合于镍柱上而被除去，穿柱液中则含有所需的靶蛋白；碧云天TEV Plus Protease (GST/His-tag)同样比较适用于酶切带有GST标签的重组蛋白，因为酶切后没有完全酶切的重组蛋白、切除的GST标签以及TEV Plus Protease (GST/His-tag)都可以结合于GST纯化介质上而被除去，穿柱液中则含有所需的靶蛋白。

TEV Plus Protease (GST/His-tag)与TEV Plus Protease (His-tag) (P2305)相比，最大的优点是不仅适合用于酶切去除带有TEV酶切位点的His标签，同时适合用于切除带有TEV酶切位点的GST标签。

酶活性单位定义：30ºC，pH8.0条件下反应1小时，能够切割3µg对照底物达85%以上所需的酶量为一个活性单位。

碧云天TEV Plus Protease (GST/His-tag)酶活性鉴定结果请参考图1。

图1. TEV Plus Protease (GST/His-tag) (P2306)切割GST标签蛋白的效果图。含有TEV Plus Protease识别位点的76kD GST标签蛋白与TEV Plus Protease (GST/His-tag)进行反应，底物的用量为3μg，酶的用量依次为0、0.10、0.25、0.50、0.67、1.00U，30ºC在1X TEV Plus Buffer中反应1小时后取样进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。酶切产物大小为约50kD的目的蛋白(Recombinant protein)和约26kD的GST标签。

TEV Plus Protease (GST/His-tag)是一种经酶工程改造和优化，具有多个突变位点的高活性和高稳定性，以及较低的酶自切割活性的烟草蚀纹病毒蛋白酶。本产品带有GST标签和His标签(6X His tag)，分子量大小约54kDa，纯度：≥95%。

TEV Plus Protease (GST/His-tag)储存液组成为：25mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 5mM DTT, 50% (v/v)甘油，pH8.0。

10X TEV Plus Buffer组成为：500mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 5mM EDTA, 10mM DTT, pH8.0。

本产品每毫升含有1000单位的酶，可用于约3mg带有TEV Plus Protease (GST/His-tag)识别位点的融合蛋白的切割。

-20ºC保存，两年有效。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。