碧云天生物技术-BeyoOrganoid类器官传代消化液(C5503-100ml)

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BeyoOrganoid™类器官传代消化液

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产品编号	产品名称	产品包装	产品价格
C5503-100ml	BeyoOrganoid™类器官传代消化液	100ml	399.00元

碧云天的BeyoOrganoid™类器官传代消化液，即BeyoOrganoid™ Organoid Passage Digestion Solution，也称为BeyoOrganoid™类器官传代酶解液或Organoid Dissociation Solution，是一种专门为类器官传代培养设计的用于消化和分散细胞的消化液。本产品为碧云天BeyoOrganoid™系列类器官培养液的配套试剂。碧云天同时提供更加温和的BeyoOrganoid™类器官传代温和消化液(C5513)。

类器官(Organoid)通常指在体外显示出与体内器官或组织相似结构和功能的复杂三维(Three-dimensional, 3D)结构[1]，更严格的定义是指由干细胞或器官祖细胞发育而来的，作为体外平台模拟其对应器官的结构和功能等多个方面的3D细胞培养物[2]。类器官在形成过程中，细胞自我组建(Self-organize)并分化为功能型的微小细胞团，模拟真实器官发育，以与体内相似的方式由细胞分序(Cell sorting out)与空间特异性的谱系分化(Spatially restricted lineage commitment)调控，需激活由细胞内在成分和外在环境(细胞外基质、培养液等)介导的各种信号通路[3]。

本产品温和、高效。相比常规的Trypsin-EDTA溶液，本产品作为一种复合酶溶液，其蛋白酶和胶原酶不含动物源性物质(Animal origin-free, AOF)。使用本产品可更好地保留类器官细胞表面受体的完整性，减少对细胞膜的损伤，保持传代后细胞的活力，温和而有效地消化和分散类器官细胞。碧云天同时提供可快速解开基质胶中蛋白质大分子间交联的BeyoOrganoid™类器官分离回收液(C5519)。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C5503-100ml	BeyoOrganoid™类器官传代消化液	100ml
—	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。4ºC保存，3个月有效。避免反复冻融。

注意事项：

在使用本产品的过程中要特别注意避免被细菌污染。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
本步骤以24孔板为例，全程操作在冰浴上进行。
1.使用前，若本产品储存于-20ºC，请提前置于4ºC解冻。
2.小心去除类器官完全培养液上清。
注：避开类器官基质胶悬滴，吸取时注意不要将悬滴吸起。
3.使用200μl移液器轻缓吹吸，破坏类器官基质胶悬滴，并将类器官基质胶悬浮液转移至15ml无菌离心管中。
4.将各孔类器官基质胶悬滴均转移至15ml离心管后，向原培养板每孔中加入少量类器官基础培养液(例如24孔板每孔125μl，6孔板每孔250μl)，将残留的类器官基质胶转移至相应的15ml无菌离心管中。
5.使用5ml移液管将类器官/基质胶/类器官完全培养液混合物上下移液吹吸20-30次，以完全破坏基质胶结构。在这一步骤中，充分机械破坏基质胶结构，将类器官细胞从基质胶中释放出来非常关键。
6.300×g室温离心3分钟，去除上清，加入5ml PBS，吹吸混匀，300×g室温离心3分钟。
7.去除上清，将沉淀物重悬于1-2ml的本产品中，上下吹吸数次，置37ºC孵育，直到类器官细胞团打散。类器官消化过程中，每2-3分钟使用移液管上下移液吹吸5-10次，并在显微镜下密切观察消化过程，严格把握类器官消化时间。
注1：通常来说，消化至单细胞或寡细胞团(由10-30个细胞组成)，则消化过程完成。
注2：某些类器官模型不应被完全消化成单个细胞，否则它们传代后的类器官结构形成能力将受损。如果有可用的模型特定信息，请参考该信息。
注3：对某些类器官模型而言，消化过长时间(>15分钟)可能会导致类器官细胞传代后生长不良甚至停止生长。
8.类器官消化到达终点后，加入5ml类器官基础培养液，吹吸混匀，300×g室温离心3分钟。
9.去除上清，将类器官沉淀物重悬于基质胶中，并进行传代培养。
参考文献：
1.Rossi G, Manfrin A, Lutolf MP. Nat Rev Genet. 2018. 19(11):671-687.
2.Gu Y, Zhang W, Wu X, Zhang Y, Xu K, et al. Clin Transl Med. 2023. 13(12):e1499.
3.Corrò C, Novellasdemunt L, Li VSW. Am J Physiol Cell Physiol. 2020. 319(1):C151-C165.
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